小分子化合物對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)及凋亡分子機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景和研究目的： 近年來(lái)，肺癌已成為諸多國(guó)家中危害最大的癌患，我國(guó)已成為世界上第一肺癌大國(guó)。肺癌死亡率居于各種惡性腫瘤之首位。在肺癌中，肺腺癌最常見、發(fā)病率最高。因此，治療肺腺癌對(duì)于降低肺癌死亡率極其關(guān)鍵。 然而迄今為止，肺腺癌細(xì)胞凋亡分子機(jī)制尚未搞清，阻礙了肺腺癌的有效治療。所以，闡明肺腺癌細(xì)胞凋亡分子機(jī)制具有重要性和必要性。 化學(xué)遺傳學(xué)的誕生為研究腫瘤細(xì)胞凋亡分子機(jī)理提供了新思路。如，依據(jù)化學(xué)遺傳學(xué)

2、，利用小分子PRIMA-1干預(yù)直腸癌細(xì)胞信號(hào)網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)：PRIMA-1上調(diào)p21及GADD45蛋白表達(dá)，激活JNK通路，誘導(dǎo)p53突變型直腸癌細(xì)胞從G2期進(jìn)入凋亡程序；再如，小分子HAl4-1干擾乳腺癌等多種腫瘤細(xì)胞，抑制Bcl-2蛋白功能，降低線粒體膜電位，激活caspase-9，-3，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。資料表明：小分子化合物能直接作用于靶蛋白、可高度實(shí)時(shí)性地研究細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)變化過(guò)程，是研究信號(hào)傳導(dǎo)的有力工具。 本研究目的在于：

3、從化學(xué)遺傳學(xué)角度出發(fā)、以小分子化合物為凋亡誘導(dǎo)工具，干預(yù)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)，研究肺腺癌A549細(xì)胞凋亡分子機(jī)制。 以A549細(xì)胞為例研究肺腺癌細(xì)胞凋亡分子機(jī)制，原因在于：第一A549屬于肺腺癌細(xì)胞系；第二A549細(xì)胞通常作為一種標(biāo)準(zhǔn)模式細(xì)胞，用來(lái)研究肺癌治療。目前對(duì)于A549細(xì)胞凋亡的研究較為零散，從化學(xué)遺傳學(xué)出發(fā)，利用小分子化合物進(jìn)行有效干預(yù)，進(jìn)而系統(tǒng)完整性地研究A549細(xì)胞凋亡分子機(jī)制，在國(guó)際上尚屬首例。 本研

4、究所使用小分子化合物為：黃樟素氧化物(3，4-(methylenedioxy)-1-(2’，3’-epoxypropyl)-benzene，SFO)及黃樟素氧化物乙基衍生物(1-ethoxy-3-(3，4-methylenedioxyphenyl)-2-propanol，EOD)。它們均來(lái)自于本課題組的小分子化合物庫(kù)。本組已往研究發(fā)現(xiàn)，SFO、EOD誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)s分別由G<,2>-M期、S期進(jìn)入凋亡程序。由于細(xì)

5、胞凋亡分子機(jī)理極其復(fù)雜，不同類型細(xì)胞的凋亡機(jī)制不同；即使同類型細(xì)胞，當(dāng)受到不同凋亡信號(hào)刺激時(shí)，凋亡機(jī)制也往往存在差異。SFO、EOD能否誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡?凋亡分子機(jī)制怎樣?目前，尚未有報(bào)道，本文對(duì)此進(jìn)行了探索。本研究不但有助于明晰肺腺癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理，而且可為開發(fā)肺腺癌治療藥物提供理論依據(jù)。 研究?jī)?nèi)容 1.初步篩選小分子化合物 2.鑒定小分子化合物對(duì)A549細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用 3.研究A5

6、49細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期分布、p53基因表達(dá)之間的關(guān)系 4.研究介導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的重要分子及信號(hào)通路 5.分析小分子化合物對(duì)caspases的激活情況 結(jié)論： 1．SFO、EOD均能抑制A549細(xì)胞增殖，但SFO增殖抑制能力強(qiáng)于EOD。 2．SFO通過(guò)上調(diào)p53蛋白水平、完全阻滯細(xì)胞周期于G<,l>期且部分阻滯于G<,2>-M期、激活Fas/FasL信號(hào)通路、激活caspase．8，-