香附揮發(fā)油誘導人肺腺癌A549細胞凋亡作用及其機制研究.pdf

1、目的:通過超臨界CO2萃取法制取香附揮發(fā)油(以下簡稱ACA)，研究ACA體外誘導人肺腺癌A549細胞凋亡作用及其機制。
　　方法:(1)采用超臨界CO2裝置萃取ACA;(2)采用MTT比色法和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性測定確定ACA抗肺癌A549細胞的量-效和時-效關系;(3)采用離體肺組織切片，判斷ACA毒性大小;(4)Hoechst33342/PI及AnnexinⅤ-EGFP/PI雙重

2、熒光染色觀察A549細胞死亡情況;(5)Fura-2AM法測定細胞內Ca2+濃度;(6)測定細胞內丙二醛(malondialdehyde，MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)，證明ACA致細胞氧化損傷作用;(7)測定細胞內ATP含量，證明ACA對細胞能量代謝的影響;(8)羅丹明123(Rh123)檢測線粒體膜電位(△ψ);(9)Western blot檢測Bcl-2、Bax表達水平，分光光度計法測

3、定半胱天冬酶-9(caspase-9)表達量。
　　結果:(1)ACA對A549細胞活力影響呈明顯濃度、時間依賴關系。ACA286μg/mL作用24h或200μg/mL作用48h，幾乎100％殺死癌細胞，效能(efficacy)高于陽性對照藥順鉑(cisplatin，DDP)，說明ACA誘導A549凋亡作用效能強大、起效迅速。(2)ACA致A549細胞膜損傷，促胞內LDH釋放增多;(3)ACA對正常肺組織的毒性在一個可接受范圍內;

4、(4)Hoechst33342/PI和AnnexinⅤ-EGFP/PI雙重熒光染色觀察細胞形態(tài)學變化，證明ACA誘導A549細胞凋亡;(5)ACA導致細胞鈣超載;(6)ACA顯著提高細胞內MDA水平，抑制SOD活性，致細胞氧化損傷;(7)ACA抑制細胞能量代謝;(8)ACA致線粒體結構嚴重受損和功能喪失，膜電位喪失;(9)ACA促Bax/Bcl-2比值升高，caspase-9活性增加。
　　結論:ACA通過誘發(fā)細胞內鈣超載、氧化應