基于EGFR、STAT3信號通路探討葦莖湯及其拆方誘導(dǎo)人肺腺癌A549細胞凋亡的作用機制.pdf

1、目的：通過體外實驗研究葦莖湯及其拆方對人肺腺癌A549細胞活性、凋亡及其相關(guān)信號通路EGFR、STAT3的影響，為葦莖湯的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：采用MTT法檢測不同劑量(低劑量、中劑量、高劑量)葦莖湯全方及其拆方清肺化痰方(葦莖)、滲濕化痰方(薏苡仁+瓜瓣)和活血化瘀方(桃仁)對人肺腺癌A549細胞生長的抑制作用；以倒置顯微鏡觀察葦莖湯及其拆方對肺癌細胞的形態(tài)學(xué)影響；以熒光顯微鏡結(jié)合AO∕EB和DAPI熒光染色觀察葦莖

2、湯及其拆方對肺癌細胞凋亡的形態(tài)學(xué)影響；利用流式細胞術(shù)檢測細胞周期，測定細胞凋亡率；應(yīng)用Western blot和實時熒光定量RT-PCR技術(shù)分別從蛋白和基因兩個層面檢測葦莖湯及其拆方對A549細胞中凋亡信號通路EGFR、STAT3的影響。
　　結(jié)果：
　　1.MTT法檢測結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，不同劑量葦莖湯及其拆方作用24h、48h、72h后，A549細胞OD值均出現(xiàn)不同程度的下降，且細胞抑制率具有時間-劑量依賴性；相

3、同劑量(中劑量)葦莖湯及其拆方作用A549細胞24h、48h、72h后，各拆方對細胞的抑制作用以清肺化痰方(葦莖)最為明顯，其次是活血化瘀方(桃仁)，滲濕化痰方(薏苡仁+瓜瓣)最弱，葦莖湯全方優(yōu)于各拆方。
　　2.倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，中劑量(2.5g·L-1)葦莖湯及其拆方作用48h后，均能使A549細胞發(fā)生不同程度的形態(tài)學(xué)改變，各拆方對細胞的作用以清肺化痰方(葦莖)最為明顯，其次是活血化瘀方(桃仁)，滲濕化痰方(薏苡仁+瓜瓣)最

4、弱，葦莖湯全方優(yōu)于各拆方。
　　3.AO∕EB熒光染色結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，中劑量(2.5g·L-1)葦莖湯及其拆方作用48h后，A549細胞的數(shù)量減少，亮度增強，甚至出現(xiàn)大量橘紅色、固縮狀的凋亡細胞；對A549細胞凋亡形態(tài)的影響以清肺化痰方(葦莖)最為明顯，其次是活血化瘀方(桃仁)，滲濕化痰方(薏苡仁+瓜瓣)最弱，葦莖湯全方優(yōu)于各拆。
　　4.DAPI熒光染色觀察發(fā)現(xiàn)，與陰性對照組相比，中劑量(2.5g·L-1)葦莖

5、湯及其拆方作用48h后，A549細胞的亮度增強，細胞核形態(tài)發(fā)生改變，染色質(zhì)出現(xiàn)聚集、邊緣化；對A549細胞凋亡形態(tài)的影響以清肺化痰方(葦莖)最為明顯，其次是活血化瘀方(桃仁)，滲濕化痰方(薏苡仁+瓜瓣)最弱，葦莖湯全方優(yōu)于各拆方。
　　5.流式細胞術(shù)檢測細胞周期結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，中劑量(2.5g·L-1)葦莖湯及其拆方作用48h后，G0∕G1期A549細胞數(shù)量顯著增加(P＜0.01)，S期和G2∕M期的細胞數(shù)量減少。

6、r>　　6.流式細胞術(shù)測定細胞凋亡結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，中劑量(2.5g·L-1)葦莖湯及其拆方作用48h后，除滲濕化痰方(薏苡仁+瓜瓣)外，其余各組A549細胞的早期凋亡率均高于陰性對照組(P＜0.05)。
　　7.Western Blot結(jié)果顯示，中劑量(2.5g·L-1)葦莖湯及其拆方作用48h后，A549細胞中凋亡相關(guān)蛋白EGFR、STAT3的表達水平均出現(xiàn)不同程度的下降，其中以清肺化痰方(葦莖)最為明顯，其次是活血

7、化瘀方(桃仁)，滲濕化痰方(薏苡仁+瓜瓣)最弱，葦莖湯全方優(yōu)于各拆方。
　　8.實時熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示，中劑量(2.5g·L-1)葦莖湯及其拆方作用48h后，A549細胞中凋亡相關(guān)基因EGFR，STAT3的表達出現(xiàn)不同程度的下調(diào)，其中以清肺化痰方(葦莖)最為明顯，其次是活血化瘀方(桃仁)，滲濕化痰方(薏苡仁+瓜瓣)最弱，葦莖湯全方優(yōu)于各拆方。
　　結(jié)論:
　　1.葦莖湯及其拆方均能抑制A549細胞的生長，使其

8、發(fā)生不同程度的形態(tài)學(xué)改變，其抑制率具有時間-劑量依賴性；各拆方對A549細胞的抑制作用以清肺化痰方(葦莖)最為明顯，其次是活血化瘀方(桃仁)，滲濕化痰方(薏苡仁+瓜瓣)最弱，葦莖湯全方優(yōu)于各拆方。
　　2.葦莖湯及其拆方可能通過影響EGFR，STAT3信號通路誘導(dǎo)A549細胞凋亡，使其發(fā)生不同程度的凋亡形態(tài)學(xué)改變，并將其阻滯于G0∕G1期；細胞凋亡、細胞周期、EGFR和STAT3信號通路均是葦莖湯及其拆方抑制肺癌細胞生長的重要靶點