藤黃酸對肺腺癌A549細胞增殖和凋亡的影響及其對STAT3基因表達的調(diào)控作用.pdf

1、目的：本文旨在研究藤黃酸對人肺腺癌A549細胞增殖與凋亡的影響，并探討其是否對STAT3存在調(diào)控作用，為藤黃酸臨床用于肺腺癌的治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：以不同濃度梯度的藤黃酸處理肺腺癌A549細胞，采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測細胞的增殖活性，采用流式細胞儀觀察藤黃酸對細胞的凋亡的影響。在相差倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學變化。免疫熒光驗證STAT3蛋白在A549細胞中的分布情況及蛋白量表達變化，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-

2、PCR)和Western blot法檢測不同濃度藤黃酸對A549細胞中STAT3mRNA和蛋白表達的影響。
　　 結果：藤黃酸(GA)可顯著抑制肺腺癌A549細胞的生長，抑制率與藥物濃度和作用時間成正相關，24h的IC50為(2.81±0.28)umol/L，當GA濃度達8umol/L時，對A549的抑制率接近80％，48、72h的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為(1.86±0.01)umol/L及(1.35±0.10)umol/

3、L。流式細胞儀進一步證實GA可誘導A549細胞凋亡：1.5 umol/L及3 umol/L GA干預A549細胞24h后，凋亡率分別為(24.38±1.42)%、(51.60±3.23)%。當GA的濃度達6umol/L時，A549的凋亡率達(77.09±1.44)%。加藥前，細胞貼壁好，可見核及核仁，呈扁平多角形，隨著藥物濃度的增加，細胞出現(xiàn)了典型的凋亡形態(tài)改變，貼壁不佳，染色質(zhì)濃縮，核膜破裂，細胞逐漸皺縮成團，突起消失，并可見凋亡小體

4、。在熒光顯微鏡下，空白對照組中的細胞形態(tài)飽滿，STAT3蛋白主要分布在細胞的胞漿中；經(jīng)DAPI核染后活細胞可發(fā)出明亮藍色熒光。3umol/L藤黃酸處理組中，活細胞明顯減少，其蛋白的熒光強度亦明顯減弱。STAT3基因在肺腺癌A549中呈現(xiàn)高表達，不同濃度的GA作用后，STAT3的mRNA及蛋白表達水平均成濃度依賴性下降，且p＜0.05，均有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：藤黃酸能明顯抑制人肺腺癌細胞A549的增殖，并誘導其凋亡，其機制可