厄羅替尼對(duì)含不同EGFR變異的人肺癌細(xì)胞以及基質(zhì)細(xì)胞的抑制實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的:
　　肺癌是世界上癌癥致死的首要原因，其中非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占肺癌的80％左右。即便采用新一代含鉑兩藥聯(lián)合化療，晚期NSCLC患者的中位生存期也只有8-10個(gè)月左右。EGFR-TKI讓人們?cè)诜伟┲委煼矫婵吹搅耸锕?，但仍?5％-30％的攜帶EGFR活化突變NSCLC患者對(duì)EGFR-TKIs原發(fā)耐藥。此外，幾乎所有含EGFR突變且對(duì)吉非替尼或厄洛替尼治療有效的

2、NSCLC患者最終仍會(huì)產(chǎn)生繼發(fā)耐藥[5]。因此，了解這類(lèi)靶向藥物的耐藥機(jī)制對(duì)如何克服耐藥或耐藥后如何選擇治療就顯得尤為重要。HGF是除EGFRT790M突變和MET擴(kuò)增外又一種涉及到原發(fā)性及繼發(fā)性耐藥的分子機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)旨在明確各種類(lèi)型肺癌細(xì)胞及腫瘤微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞在EGFR-TKI作用下其細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況以及宿主微環(huán)境中各種生長(zhǎng)因子（如HGF、TGF-α、IGF1和EGF）的表達(dá)變化，為后續(xù)開(kāi)展EGFR耐藥機(jī)制研究提供前期理論依據(jù)。<

3、br>　　方法:
　　1.應(yīng)用MTT法測(cè)定EGFR敏感突變型肺癌細(xì)胞PC9的厄洛替尼的耐藥指數(shù)IC50。
　　2.應(yīng)用ELISA法檢測(cè)單獨(dú)培養(yǎng)細(xì)胞(EGFR敏感突變型肺癌細(xì)胞PC9、EGFR耐藥突變型肺癌細(xì)胞H1975、EGFR野生型肺癌細(xì)胞A549、腫瘤基質(zhì)細(xì)胞MRC5)上清液中HGF、TGF-α、IGF1和EGF在加或不加厄洛替尼(濃度為方法1中所測(cè)IC50)情況下的表達(dá)含量。
　　結(jié)果:
　　1.MTT法實(shí)

4、驗(yàn)結(jié)果顯示，PC9細(xì)胞對(duì)厄洛替尼敏感，與對(duì)照組（不加藥組）相比，隨著厄洛替尼濃度增加，PC9細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率也相應(yīng)提高，呈劑量依賴(lài)性。最終實(shí)驗(yàn)測(cè)得IC50為3.33μmol，P＜0.01，與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.加入厄洛替尼后，A549/PC9/MRC-5細(xì)胞上清中TGF-α含量均增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;H1975細(xì)胞上清中TGF-α含量下降，且無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.加入厄洛替尼后，H1975/PC9兩組細(xì)胞上清中表

5、達(dá)IGF-1增加，前者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;A549/MRC-5兩組細(xì)胞在加藥后上清中表達(dá)的IGF-1減少，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.加入厄洛替尼后，H1975細(xì)胞、A549細(xì)胞、PC-9細(xì)胞及MRC-5細(xì)胞，表達(dá)EGF含量與未加藥對(duì)照組比較未見(jiàn)明顯變化，均表達(dá)極少量EGF，其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.加入厄洛替尼后，H1975及A549細(xì)胞表達(dá)HGF分別增加和減少，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;PC-9及MRC-5細(xì)胞加入藥后表達(dá)HGF分

6、別增多和減少，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.本實(shí)驗(yàn)中提示四種細(xì)胞加入厄洛替尼前后的上清液中均表達(dá)相對(duì)極少量的EGF，且無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，除外實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程可能出現(xiàn)的誤差外，考慮EGF自分泌或旁分泌作用在肺癌耐藥中作用可能不大。
　　2.與其他三種細(xì)胞因子比較，四種細(xì)胞系均表達(dá)相對(duì)較高的HGF，提示HGF在細(xì)胞各種生物活性中可能起到更大的作用。PC-9/MRC-5細(xì)胞系在加入厄洛替尼前后表現(xiàn)出有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變化，而