環(huán)孢素A通過抑制STAT3增加肺癌細胞對吉非替尼的敏感性.pdf

1、吉非替尼是第一代以表皮生長因子受體(EGFR)為靶點的可逆性小分子酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)，對具有EGFR敏感突變的晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者有著極好的療效，能夠顯著延長患者生存時間，改善生活質(zhì)量。目前EGFR抑制劑已成為具有EGFR敏感突變的晚期NSCLC患者的一個標準治療。然而，幾乎所有初始治療敏感的患者最終仍不可避免的出現(xiàn)了耐藥，多項臨床研究顯示其治療的中位疾病進展時間(PFS)約為10個月。環(huán)孢素A(CsA)

2、作為一個多藥耐藥(MDR)相關(guān)蛋白抑制劑，能夠逆轉(zhuǎn)多種化療藥物的耐藥。最新研究發(fā)現(xiàn)CsA還可以通過抑制活化T細胞核因子（NFAT）克服小分子靶向藥物的耐藥，如伊馬替尼，達沙替尼，selumetinib等。CsA能否增敏EGFR-TKI，并進一步克服耐藥尚未有報道。如何利用目前可以獲得的方法來逆轉(zhuǎn)EGFR-TKIs的耐藥值得進一步的探索。
　　目的:
　　通過體內(nèi)外實驗，探討環(huán)孢素A聯(lián)合吉非替尼對EGFR-TKI敏感及耐藥肺癌

3、細胞增殖和凋亡的影響。并深入分析CsA增敏并逆轉(zhuǎn)吉非替尼耐藥的機制。
　　方法:
　　選取初始吉非替尼敏感及耐藥肺癌細胞株，并通過持續(xù)吉非替尼處理建立獲得性耐藥細胞株;采用MTS方法分析CsA是否可以增加各類肺癌細胞株細胞對于吉非替尼的敏感性;運用流式細胞儀定量分析藥物處理后細胞凋亡及細胞周期的改變;建立非小細胞肺癌裸鼠移植瘤模型評估CsA對吉非替尼在體內(nèi)的增敏作用;通過Western blot和免疫熒光分析CsA聯(lián)合吉非替

4、尼處理后的NSCLC細胞中STAT3，Akt，Erk以及NFAT1等與藥物敏感性相關(guān)分子的激活情況;并通過siRNA的方法確認下調(diào)STAT3或NFAT1后各組肺癌細胞對吉非替尼敏感性的變化。進一步收集經(jīng)EGFR-TKI治療的肺癌患者腫瘤樣本，分析腫瘤細胞中STAT3及其磷酸化水平與EGFR-TKI治療效果的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　在EGFR敏感突變、原發(fā)耐藥及獲得性耐藥的肺癌細胞株中，CsA均能提高吉非替尼的增殖抑制作用。進

5、一步研究提示CsA可以增加吉非替尼誘導(dǎo)的細胞凋亡，但未能影響吉非替尼對細胞周期的阻滯效果。
　　吉非替尼可以誘導(dǎo)肺癌細胞株STAT3的激活，獲得性耐藥細胞株中p-STAT3的水平明顯高于其親本細胞株。CsA可以明顯抑制STAT3的激活，減少Bcl-2的表達，從而增敏吉非替尼。為了證實STAT3是CsA增敏吉非替尼的關(guān)鍵分子，我們進一步用siRNA下調(diào)STAT3，結(jié)果發(fā)現(xiàn)STAT3的siRNA增敏效果與CsA類似，其可以促進吉非替尼

6、的增殖抑制作用和增加細胞凋亡。而下調(diào)NFAT1未能實現(xiàn)增敏的效果。
　　裸鼠移植瘤模型進一步證實CsA能夠增加吉非替尼對腫瘤生長的抑制作用。從給藥的第7天開始，CsA聯(lián)合吉非替尼組平均腫瘤體積較吉非替尼單藥組明顯縮小(p＜0.05)。聯(lián)合治療組腫瘤組織中p-STAT3和Bcl-2的表達均明顯低于吉非替尼單藥組。
　　我們進一步分析了22例經(jīng)EGFR-TKI治療的患者臨床樣本，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EGFR-TKI治療的效果與STAT3磷酸

7、化水平密切相關(guān)，p-STAT3高組治療的PFS顯著低于p-STAT3低組(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　CsA可以增加肺癌細胞對于吉非替尼治療的敏感性，其增敏作用主要通過增加吉非替尼誘導(dǎo)的細胞凋亡來實現(xiàn)。機制研究發(fā)現(xiàn)吉非替尼誘導(dǎo)的反饋性STAT3激活與肺癌細胞的藥物敏感性及耐藥密切相關(guān)，CsA通過抑制吉非替尼誘導(dǎo)的STAT3激活，下調(diào)Bcl-2的表達，從而增敏各類肺癌細胞。吉非替尼聯(lián)合CsA可以作為NSCLC治療的一種新