PI3K-AKT通路的活化與肺癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼反應(yīng)性的關(guān)系.pdf

1、目的：通過體外研究探討PI3K/Akt通路與吉非替尼對(duì)肺癌療效的關(guān)系，探索pAkt及其所在通路對(duì)吉非替尼療效的預(yù)測(cè)價(jià)值，有助于臨床篩選出吉非替尼治療的優(yōu)勢(shì)人群。在吉非替尼敏感性不同的肺癌細(xì)胞株中，通過抑制PI3K/Akt信號(hào)通路的活化，分析吉非替尼對(duì)肺癌細(xì)胞的抑制效率的改變規(guī)律，進(jìn)一步探討吉非替尼的耐藥機(jī)制，同時(shí)探討pAkt可能是逆轉(zhuǎn)肺癌吉非替尼耐藥、提高其療效的治療靶點(diǎn)之一，從而有望通過聯(lián)合用藥或多靶點(diǎn)藥物來逆轉(zhuǎn)耐藥，為吉非替尼耐藥人

2、群后續(xù)治療的選擇提供一定的參考。
　　 方法：選取5株突變狀態(tài)不同的肺癌細(xì)胞株：H292、H1975、H460、H358和H446。采用MTT法測(cè)定LY294002和吉非替尼對(duì)肺癌細(xì)胞的生長抑制曲線，比較各株細(xì)胞對(duì)LY294002和吉非替尼的敏感性及不同濃度LY294002對(duì)肺癌細(xì)胞吉非替尼敏感性的影響。
　　 選取H292、H1975、H460和H4464株細(xì)胞，用無血清的培養(yǎng)基饑餓24小時(shí)后，分為以下四組處理：吉非替

3、尼5gM組、LY29400210μM組、LY29400210μM+吉非替尼5μM組及正常對(duì)照組，加藥2小時(shí)后提取蛋白，用Western Blot免疫印跡法觀察肺癌細(xì)胞Akt、pAkt、P13K、EGFR和pEGFR5種蛋白的表達(dá)量，比較吉非替尼、LY294002及LY294002聯(lián)合吉非替尼對(duì)肺癌細(xì)胞EGFR及PI3K/Akt通路活化的影響。
　　 結(jié)果：LY294002和吉非替尼對(duì)各組肺癌細(xì)胞均表現(xiàn)出抑制作用，且呈濃度依賴性。

4、而當(dāng)LY294002和吉非替尼聯(lián)合作用時(shí)，吉非替尼對(duì)細(xì)胞的抑制作用增強(qiáng)，且隨著LY294002濃度的增加，各組細(xì)胞吉非替尼的敏感性也越高。H292、H1975、H460、H358及H446的LY294002 IC50濃度分別為17.06μM、16.57μM、11.88μM、15.65μM、13.90μM；吉非替尼IC50濃度為15.13μM、5.81μM、14.11μM、10.33μM、39.64μM；LY2940022μM處理后吉非替

5、尼IC50濃度為5.41μM、5.10μM、3.9μM、4.1μM、11.69μM；LY29400210μM處理后吉非替尼IC50濃度為0.7μM、0.67μM、1.1μM、1.4μM、2.41μM。LY2940022μM組H292、H1975、H460、H358和H446較單用吉非替尼組吉非替尼敏感性分別提高65.32％、20.31％、72.71％、58.16％、68.15％；LY29400210gM組H292、H1975、H460、

6、H358和H446較單用吉非替尼組吉非替尼敏感性分別提高95.51％、89.53％、92.30％、85.71％、93.43％。即H1975細(xì)胞對(duì)吉非替尼敏感，而H292、H460、H358和H446對(duì)吉非替尼耐藥。P13K抑制劑LY294002可提高肺癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼的敏感性，且在吉非替尼耐藥細(xì)胞中提高幅度更加明顯。
　　 正常情況下，吉非替尼敏感株H1975肺癌細(xì)胞PI3K/Akt通路上游蛋白EGFR及pEGFR和PI3K/A

7、kt通路相關(guān)蛋白p110α、Akt及pAkt表達(dá)量都很高，Akt及EGFR活化程度均很高；吉非替尼處理后，pEGFR和pAkt明顯被抑制。而H292、H460和H4463株吉非替尼耐藥肺癌細(xì)胞雖有較高的Akt表達(dá)，但pAkt、EGFR及pEGFR的表達(dá)量均偏低，Akt及EGFR活化程度也遠(yuǎn)低于敏感株H1975；吉非替尼處理后，pEGFR和pAkt抑制不明顯。PI3K抑制劑LY294002對(duì)各肺癌細(xì)胞株pAkt均有明顯的抑制作用，對(duì)pEG

8、FR也有一定的抑制作用。當(dāng)LY294002聯(lián)合吉非替尼作用于肺癌細(xì)胞時(shí)，吉非替尼對(duì)肺癌細(xì)胞EGFR和Akt磷酸化的抑制作用明顯增強(qiáng)，且在吉非替尼耐藥的細(xì)胞株中更加明顯。
　　 結(jié)論：研究結(jié)果提示了PI3K/Akt通路在肺癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼敏感性中起重要作用。同時(shí)提示pAkt陽性可能不是非小細(xì)胞肺癌吉非替尼有效的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，但pAkt的高表達(dá)可能預(yù)示非小細(xì)胞肺癌對(duì)吉非替尼有較好的反應(yīng)。PI3K抑制劑LY294002可明顯增強(qiáng)非小細(xì)