穹窿海馬傘切割大鼠海馬內(nèi)Brn-4 mRNA的表達變化.pdf

1、目的：觀察切割穹窿海馬傘大鼠海馬與正常海馬內(nèi)Bm-4mRNA表達的差異，探討穹窿海馬傘切割后海馬內(nèi)神經(jīng)再生與修復的分子生物學機制。 方法：(1)RT-PCR：42只SD大鼠隨機分成7組，每組6只。l組為正常對照組，其余6組分別為切割雙側穹窿海馬傘后1、3、7、14、21和28d組。取各組大鼠的海馬組織，提取總RNA，采用半定量RT-PCR法分析穹窿海馬傘切割后海馬內(nèi)Bm-4mRNA表達水平的變化。以各泳道中Bm-4與GAPDH條

2、帶的光密度比值表示Bm-4mRNA的相對表達量，使用Stata7．0統(tǒng)計學軟件進行單因素方差分析和兩兩比較。(2)原位雜交：取6只SD大鼠，切割右側穹窿海馬傘。切割后14d，灌注固定，制備海馬部位冰凍切片；采用體外轉錄法制備地高辛標記的Bm-4RNA探針，進行原位雜交，觀察兩側海馬組織內(nèi)Bm-4mRNA的表達變化。每只動物取前、中、后3張切片，分別對每張切片切割側和正常側Bm-4mRNA陽性細胞進行計數(shù)和光密度值檢測，并應用Stata7

3、．0統(tǒng)計學軟件對兩側Bm-4mRNA陽性細胞的數(shù)量和平均光密度值進行配對t檢驗分析。 結果：(1)海馬內(nèi)Bm-4mRNA的表達量在正常組為O．138±0．06，在切割后第3d(0．256±0．54)開始升高，14d(0．719±O．124)達到最高水平，隨后下降，28d(O．189±0．059)左右恢復至正常水平。(2)切割側和正常側海馬錐體細胞層和齒狀回顆粒層細胞均有Bm-4mRNA表達，Bm-4mRNA陽性細胞數(shù)量無明顯差異

4、，但切割側Bm-4mRNA陽性細胞的平均光密度值(0．27±0．06)較正常側(O．14±0．02)明顯增加，t值為¨．4709，P<0．01。在切割側齒狀回門區(qū)和顆粒下層中觀察到Bm-4mRNA陽性細胞(40．5±9．37)，平均光密度值為0．28±0．05，而正常側僅有少量陽性細胞(6．5±2．07)，且平均光密度值僅為0．09±0．02，兩側陽性細胞數(shù)和平均光密度值相比較，P均