半乳凝素-1與肝癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：1.分析臨床切除的原發(fā)性肝癌標(biāo)本中Gal-1的表達(dá)，并統(tǒng)計(jì)其與臨床相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性；2.構(gòu)建Gal-1低表達(dá)的干擾質(zhì)粒，驗(yàn)證其干擾效果，為之后的細(xì)胞系的構(gòu)建奠定基礎(chǔ)；3.在構(gòu)建成功低表達(dá)或過(guò)表達(dá)Gal-1的真核質(zhì)粒后，選取Gal-1表達(dá)水平較高的的肝癌細(xì)胞系進(jìn)行Gal-1低表達(dá)肝癌細(xì)胞構(gòu)建及選取Gal-1表達(dá)水平低的肝癌細(xì)胞系進(jìn)行Gal-1過(guò)表達(dá)肝癌細(xì)胞株構(gòu)建，為之后分析Gal-1在肝癌細(xì)胞中的生物學(xué)作用奠定基礎(chǔ)；4.在構(gòu)建成功的

2、肝癌細(xì)胞系中，分析其對(duì)肝癌的遷移、侵襲等影響，并初步探索其機(jī)制。
　　方法：1.提取62例原發(fā)性肝癌臨床標(biāo)本，運(yùn)用western blot技術(shù)分析Gal-1在這些臨床臨床樣本中的表達(dá)，通過(guò)灰度值分析軟件分析Gal-1的灰度值，并分成高低兩組，收集整理相應(yīng)的臨床資料，再通過(guò)相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)方法分析肝癌中Gal-1與相關(guān)臨床數(shù)據(jù)的意義；2.通過(guò)文獻(xiàn)查找相關(guān)的Gal-1干擾序列，并在此基礎(chǔ)上合成相應(yīng)的干擾序列，利用基因重組技術(shù)，構(gòu)建干擾或者過(guò)

3、表達(dá)的真核質(zhì)粒；3.將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過(guò)轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染到肝癌細(xì)胞株，并在藥物篩選下，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的單克隆，從而擴(kuò)增得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株；4.在構(gòu)建成功的肝癌細(xì)胞系的基礎(chǔ)上，分析Gal-1對(duì)肝癌細(xì)胞系的遷移、侵襲等的影響，并對(duì)機(jī)制進(jìn)行初步的探討。
　　結(jié)果：1.通過(guò)對(duì)62例原發(fā)性肝癌臨床標(biāo)本中Gal-1的量化，并分析與臨床數(shù)據(jù)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)肝癌中高表達(dá)Gal-1的臨床樣本較肝癌中Gal-1低表達(dá)的分化程度低、腫瘤大、轉(zhuǎn)移性高；2.通過(guò)對(duì)所

4、構(gòu)建質(zhì)粒的測(cè)序及瞬轉(zhuǎn)到肝癌細(xì)胞株中，構(gòu)建的真核干擾質(zhì)粒序列正確，干擾效果可；3.經(jīng)過(guò)藥物的篩選，明確了各株細(xì)胞株的藥物篩選濃度，并成功構(gòu)建了干擾效果好的細(xì)胞株；4.對(duì)干擾Gal-1細(xì)胞株的分析，發(fā)現(xiàn)Gal-1干擾后細(xì)胞株的遷移及侵襲能力減弱，而Gal-1重組因子（r-Gal）及過(guò)表達(dá)Gal-1的細(xì)胞株則能促進(jìn)其遷移和侵襲，同時(shí)發(fā)現(xiàn)Gal-1與肝癌細(xì)胞株發(fā)生上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)。
　　結(jié)論：1.Gal-1與肝癌的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移相關(guān)；2.正