版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、腫瘤轉(zhuǎn)移始終是腫瘤防治工作中面臨的難題,只有有效控制、阻斷腫瘤轉(zhuǎn)移才可能實現(xiàn)腫瘤的治愈。腫瘤在演進過程中,一些腫瘤細胞具有了侵襲和轉(zhuǎn)移能力,而這種轉(zhuǎn)移表型的獲得在很大程度上是由于腫瘤細胞內(nèi)基因發(fā)生異常改變引起的。目前,從分子水平揭示腫瘤轉(zhuǎn)移的本質(zhì),研究腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因成為腫瘤轉(zhuǎn)移研究的熱點。
溶血磷脂酸酰基轉(zhuǎn)移酶(Lysophosphatidic acid acyltransferase,LPAAT)是細胞內(nèi)參與磷脂生成及
2、代謝的酶類,能夠催化?;o酶A 上的酰基轉(zhuǎn)移到溶血磷脂酸(LPA)生成磷脂酸(PA),LPAAT蛋白家族目前已發(fā)現(xiàn)有8個成員,有研究發(fā)現(xiàn),LPAAT在髓性白血病細胞中表達上調(diào),而且其表達水平與白血病細胞的異常增殖和耐藥性有關(guān)。還有研究表明LPAAT在卵巢癌細胞中表達上調(diào),并且其表達水平與腫瘤的惡性程度及預(yù)后相關(guān)。
本實驗主要以溶血磷脂酸?;D(zhuǎn)移酶家族成員—LPAAT-theta(又稱mag-1,metastasis ass
3、ociated gene-1)和LPAAT-beta作為研究對象,通過改變mag-1在腫瘤細胞內(nèi)的表達水平,研究實驗動物體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生的變化情況,以及腫瘤轉(zhuǎn)移細胞對微環(huán)境適應(yīng)能力;通過改變LPAAT-beta在腫瘤細胞內(nèi)的表達水平,初步探討LPAAT-beta與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。為了解LPAAT蛋白家族在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的功能和分子機制提供依據(jù)。
主要研究結(jié)果如下:
(1)mag-1與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)性的研究通過
4、小鼠體內(nèi)自發(fā)成瘤和轉(zhuǎn)移實驗確定mag-1與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系。以shRNA敲低mag-1的表達,敲低實驗組小白鼠乳腺生成原發(fā)瘤的平均重量為2.065±0.241g,而空白組與無關(guān)干涉組小鼠乳腺生成的原發(fā)瘤的平均重量分別為3.998±0.597g和3.268±0.638g。敲低實驗組小于空白組和無關(guān)干涉組;而且敲低實驗組小白鼠肺部生成腫瘤轉(zhuǎn)移灶個數(shù)平均為0.889±0.269個,而空白組與無關(guān)干涉組小鼠肺部生成的轉(zhuǎn)移灶個數(shù)平均分別為7.182
5、±1.146個和9.143±1.033個。
敲低實驗組的數(shù)量明顯少于空白組和無關(guān)干涉組。說明干涉mag-1的表達不僅能夠抑制原發(fā)瘤的生長,而且還能夠抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生發(fā)展。
(2) mag-1對腫瘤生長與轉(zhuǎn)移微環(huán)境的適應(yīng)研究增強HIF-1a蛋白穩(wěn)定性的研究。上調(diào)mag-1的表達能夠增加腫瘤細胞內(nèi)HIF-1a 蛋白的表達;反之,下調(diào)mag-1的表達能夠減少腫瘤細胞內(nèi)HIF-1a蛋白的表達。進一步實驗證實,mag
6、-1過表達能夠增加腫瘤細胞內(nèi)HIF-1a蛋白的穩(wěn)定性,延長HIF-1a蛋白的半衰期,從而增加了腫瘤細胞內(nèi)HIF-1a蛋白的積累量。
在mag-1 對HIF-1a下游靶基因的調(diào)控研究發(fā)現(xiàn),mag-1 過表達實驗組H1299細胞中HIF-1a基因活性為0.612±0.014,空載組H1299細胞中HIF-1a基因活性為0.434±0.010;在氧氣濃度為0.5%的低氧條件下,mag-1過表達實驗組H1299細胞中HIF-1a基
7、因活性為1.139±0.092,空載組H1299細胞中HIF-1a基因活性為0.985±0.044;而且在正常細胞(猴腎成纖維細胞cos7)內(nèi)同樣能夠增加HIF-1a蛋白基因的活性;同時檢測HIF-1a蛋白下游靶基因發(fā)現(xiàn),mag-1過表達上調(diào)了VEGF、Glut-1等基因的表達水平。說明mag-1能夠增強HIF-1a的基因活性,激活HIF-1a下游靶基因的表達水平,增強了腫瘤細胞對低氧的適應(yīng)能力。
(3) LPAAT家族成
8、員LPAAT-beta與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)性的研究。
通過檢測LPAAT-beta在多種腫瘤細胞系中的表達可知,LPAAT-beta在多種腫瘤細胞系中的表達存在差異,其中在HELF、PLA801C細胞系中的表達水平較低,在HeLa、A549細胞系中較高。之后,利用人胚肺成纖維細胞HELF進行了轉(zhuǎn)染LPAAT-beta與mag-1單克隆穩(wěn)定細胞株的篩選鑒定。獲得了LPAAT-beta相對高表達單克隆穩(wěn)定細胞株C7、C3、F4,以及
9、mag-1相對高表達單克隆穩(wěn)定細胞株D9、D6、D4。在此基礎(chǔ)上,利用體外細胞生物學實驗測定了細胞增殖能力變化,穩(wěn)定過表達LPAAT-beta和mag-1的實驗組OD值分別為0.435和0.408,與這兩組相比,空白組和空載組細胞在培養(yǎng)到第6天所測到的OD值分別為0.183和0.188。LPAAT-beta與mag-1 過表達實驗組的增殖能力高于空白組和空載組。
而且,與空白組和空載組相比,LPAAT-beta與mag-1
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白與腫瘤(腫瘤、乳腺癌)骨轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf
- 腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達與宮頸癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性的研究.pdf
- 鋅指蛋白Apak的表達與腫瘤相關(guān)性的研究.pdf
- 腫瘤相關(guān)蛋白表達與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性探討.pdf
- mag-2基因及與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)性的研究.pdf
- RhoC蛋白與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)性的初步研究.pdf
- 穿通支原體感染與腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf
- TGFBI蛋白與多倍體腫瘤及腫瘤耐藥的相關(guān)性研究.pdf
- 凝血指標與惡性腫瘤及其轉(zhuǎn)移相關(guān)性的實驗研究.pdf
- 胸腰椎轉(zhuǎn)移性腫瘤的手術(shù)療效與影響因素的相關(guān)性研究.pdf
- 金屬硫蛋白與腫瘤相關(guān)性的研究進展
- 血清腫瘤異常蛋白與胃癌化療效果的相關(guān)性研究.pdf
- 熒光蛋白分子探針與腫瘤代謝的相關(guān)性成像研究.pdf
- 不同中醫(yī)證型與腫瘤生長及轉(zhuǎn)移相關(guān)性的實驗研究.pdf
- 不同中醫(yī)證型脫垂性內(nèi)痔與Fibulin蛋白家族的相關(guān)性研究.pdf
- 肺癌原發(fā)灶FDG攝取與腫瘤大小及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf
- 多藥耐藥基因和腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)性臨床研究.pdf
- Snail與EMT相關(guān)蛋白在轉(zhuǎn)移性脊柱腫瘤中的表達.pdf
- 骨橋蛋白與子宮內(nèi)膜癌細胞侵襲、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf
- NIRF蛋白與HBV核心蛋白的相關(guān)性研究.pdf
評論
0/150
提交評論