TNF-α缺失對(duì)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化影響的研究.pdf

1、目的:動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)所致的心血管疾病是嚴(yán)重危害人類生命健康的疾病之一.因此,研究動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制,并努力找到干預(yù)其機(jī)制的方法,對(duì)冠心病防治有著非常重要的意義.越來越多的證據(jù)表明動(dòng)脈粥樣硬化是一炎癥性疾病,炎癥反應(yīng)伴隨著動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展直至其斑塊破裂的整個(gè)過程,眾多的細(xì)胞和化學(xué)因子參與其中.腫瘤致死因子-α(TNF-α)是一多效性的炎癥和免疫調(diào)節(jié)因子,目前的研究結(jié)果證實(shí),它具有推動(dòng)動(dòng)脈粥

2、樣硬化發(fā)展的作用.而臨床研究發(fā)現(xiàn)它富集于動(dòng)脈粥樣硬化的病變處,卻不存在于正常的組織中,這成為其參與動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)的直接證據(jù).但是目前的研究通過大多間接手段,比如體外細(xì)胞的培養(yǎng)和患者的臨床指標(biāo)來證明TNF-α是動(dòng)脈粥樣硬化的主要標(biāo)志因子之一.我們?cè)谘芯縏NF-α缺失的小鼠模型的動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病情況的基礎(chǔ)上建立ApoE和TNF-α雙基因缺失的動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型(A/T KO),通過這種新的小鼠模型來直接研究TNF-α缺失對(duì)動(dòng)脈粥樣硬

3、化的形成及發(fā)展的影響.方法:以TNF-α單基因敲除小鼠(T KO)作為實(shí)驗(yàn)組,野生型C57B6J小鼠(WT)作為對(duì)照組,檢測(cè)TNF-α缺失對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的影響.另構(gòu)建載脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)和TNF-α雙基因敲除小鼠(A/T KO),以ApoE單基因敲除小鼠(A KO)作為對(duì)照.所有實(shí)驗(yàn)小鼠自3周齡斷奶后高脂飼喂.以3周齡時(shí)的血脂水平作為原點(diǎn)(OW),分別在實(shí)驗(yàn)的0,2,4,8,12W時(shí)檢測(cè)各模型小鼠的生

4、化指標(biāo):血清總膽固醇(total cholesterol,TC)和甘油三脂(triglycerides,TG),并用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.在實(shí)驗(yàn)的12,24w時(shí),取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的主動(dòng)脈,經(jīng)10%的甲醛固定,流水沖洗后,用生物冰袋膠包埋,-20℃下做連續(xù)冰凍切片,用求積儀進(jìn)行病變程度分析.結(jié)論:通過兩組實(shí)驗(yàn)證明,無論是不易誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化野生型C57B6J小鼠,還是易形成動(dòng)脈粥樣硬化的基因工程小鼠,TNF-α基因的缺失會(huì)降低其血脂水平,