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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(Serine Palmitoyltransferase,SPT)是鞘磷脂從頭合成途徑中的第一個(gè)限速酶。SPT是一種膜蛋白,有三個(gè)亞基:LCB1,LCB2和LCB3。SPT和鞘磷脂已經(jīng)被證實(shí)能影響動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS),而巨噬細(xì)胞是已知的在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展中起關(guān)鍵作用的細(xì)胞。巨噬細(xì)胞由髓系細(xì)胞分化而來,巨噬細(xì)胞和髓系細(xì)胞SPT對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的作用還不清楚。為了解答這個(gè)
2、問題,我們構(gòu)建了髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠模型,研究其對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化病灶的影響,為尋找治療動(dòng)脈粥樣硬化新的途徑或靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:
(1)通過采用Sptlc2-Flox(Sptlc2-10xp/loxp)小鼠和轉(zhuǎn)基因(Lysozyme M cre,LysM-cre)小鼠雜交,構(gòu)建髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠,并運(yùn)用基因?qū)W方法鑒定小鼠構(gòu)建成功與否。
(2)通過骨髓移植的方
3、法,移植髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠的骨髓到Ldlr-/-小鼠體內(nèi)。骨髓移植后,小鼠喂以高脂高膽固醇飼料12周,促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化病灶生成。
(3)骨髓移植前,檢測(cè)小鼠的血細(xì)胞數(shù)目;骨髓移植后第8周末,驗(yàn)證小鼠的基因型;高脂高膽固醇飼養(yǎng)第8周末,檢測(cè)小鼠的血細(xì)胞數(shù)目和血脂含量。
(4)高脂高膽固醇飼養(yǎng)第12周末,全面分析小鼠主動(dòng)脈弓、主動(dòng)脈根部和完整主動(dòng)脈的動(dòng)脈粥樣硬化病灶大小。
結(jié)果:<
4、br> (1)構(gòu)建髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠后,我們得到的小鼠子代有兩種基因型:一種是有LysM-cre的表達(dá),這種小鼠的髓系細(xì)胞Sptlc2基因雜合性缺失;另一種是沒有LysM-cre的表達(dá),這種小鼠的髓系細(xì)胞Sptlc2基因表現(xiàn)型正常。基因?qū)W鑒定表明,髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠構(gòu)建成功。
(2)骨髓移植8周后,基因?qū)W鑒定表明,骨髓移植是成功的,且造血干細(xì)胞完全被替換。骨髓移植前后,和對(duì)照組相比
5、,髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠的血細(xì)胞數(shù)目沒有明顯差異。骨髓移植后,Ldlr-/-小鼠在喂以高脂高膽固醇飼料第8周末,已形成高脂血癥,為動(dòng)脈粥樣硬化病灶的形成提供了有利條件。
(3)在喂以高脂高膽固醇飼料12周后,兩組Ldlr-/-小鼠都有動(dòng)脈粥樣硬化病灶。和對(duì)照組相比,髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠的主動(dòng)脈弓粥樣硬化病灶明顯減少、主動(dòng)脈根部病灶面積顯著性減少35%、完整主動(dòng)脈粥樣硬化病灶面積顯著性減少30%
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