美樂(lè)托寧對(duì)ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)采用ApoE基因敲除小鼠作為動(dòng)脈粥樣硬化模型，對(duì)比研究松果體激素一美樂(lè)托寧(褪黑素，MLT)及抗氧化維生素—維生素E(vitaminE，VitE)對(duì)apoE基因敲除小鼠主動(dòng)脈竇動(dòng)脈粥樣斑塊形成、血中一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)的水平、血清及肝組織中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響，并初步探討其相關(guān)機(jī)制。 方法：本次實(shí)驗(yàn)采用32只雄性18周齡ApoE基因敲除小鼠(ApoE-／-)及8只雄性

2、18周齡C57BL／6J小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。將32只ApoE基因敲除小鼠隨機(jī)分為4組：模型對(duì)照組、高劑量melatonin組(HMLT組)、低劑量melatonin組(LMLT組)及vitamin E對(duì)照組(VE組)，C57BL／6J小鼠作為空白對(duì)照組。HMLT組每只予以melatonin 20mg／kg，每日一次灌胃，LMLT組每只予以melatonin10mg／kg每日一次灌胃，VE組每只予VitE100mg／kg每日一次灌胃，空白及

3、模型對(duì)照組每日予以等量生理鹽水灌胃。所有實(shí)驗(yàn)小鼠均放在層流架中分籠喂養(yǎng)，自由攝食及飲水。每周稱重，連續(xù)灌胃6周后，以水合氯醛麻醉(30μl／10g)后，開(kāi)胸經(jīng)心臟穿刺取血，處死小鼠，并取出小鼠的肝臟、心臟及主動(dòng)脈。進(jìn)行以下研究：①測(cè)量各組小鼠體重、心臟及肝臟重量；②采用特異性放射免疫分析法測(cè)定血漿ET水平；③硝酸還原酶法測(cè)定血清NO水平；④硫代巴比妥酸比色法測(cè)定血中及肝臟組織勻漿中MDA的含量；⑤采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血中及肝組織勻漿中

4、SOD的活性；⑥采用圖像分析法分析主動(dòng)脈竇動(dòng)脈粥樣斑塊面積以評(píng)價(jià)AS粥樣硬化面積大小。 結(jié)果： 1．各組小鼠體重的變化及心、肝臟重量的比較： 各組小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重明顯增加，但同一時(shí)期不同實(shí)驗(yàn)組小鼠體重均值差異無(wú)顯著性，不同實(shí)驗(yàn)組小鼠心體比、肝體比均值差異無(wú)顯著性； 2．Melatonin與Ⅵt E對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠血清及肝組織勻漿MDA、SOD水平的影響： ApoE基因敲除陽(yáng)性組小鼠血清及肝組織中MDA的

5、濃度明顯高于空白對(duì)照組，HMLT組，LMLT組及VE組血清及肝組織中MDA低于陽(yáng)性對(duì)照組，HMLT組MDA值低于VE組，亦低于LMLT組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。 ApoE基因敲除陽(yáng)性對(duì)照組血清及肝組織勻漿中SOD水平顯著低于空白對(duì)照組，HMLT組，LMLT組及VE組血清及肝組織中SOD高于陽(yáng)性對(duì)照組，HMLT組的SOD值高于VE組，亦高于LMLT組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。 3．Melatonin與VitE對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠血清NO水平及血漿

6、ET水平的影響： ApoE基因敲除陽(yáng)性對(duì)照組血清NO水平顯著低于空白對(duì)照組，HMLT組，LMLT組及VE組血清。NO高于陽(yáng)性對(duì)照組，HMLT組更高于VE組及LMLT組。 ApoE基因敲除陽(yáng)性對(duì)照組血漿ET值明顯高于空白對(duì)照組，HMLT組，LMLT組及VE組血漿中ET低于陽(yáng)性對(duì)照組，HMLT組ET值較LMLT組和VE組更低。 4．Melatonin與VitE對(duì)小鼠主動(dòng)脈竇動(dòng)脈粥樣斑塊形成的影響：小鼠主動(dòng)脈竇經(jīng)冰凍切

7、片油紅O染色后，顯微鏡下觀察?？瞻讓?duì)照組小鼠主動(dòng)脈竇未見(jiàn)有斑塊形成；模型組小鼠主動(dòng)脈竇脂質(zhì)斑塊面積較melatonin及vitE組嚴(yán)重。HE染色顯微鏡下觀察小鼠動(dòng)脈粥樣斑塊結(jié)構(gòu)可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、泡沫細(xì)胞的聚集、纖維母細(xì)胞的增生。 HMLT組，LMLT組及VE組的實(shí)驗(yàn)小鼠主動(dòng)脈竇動(dòng)脈粥樣斑塊面積％均值均低于模型組。其中HMLT組小鼠動(dòng)脈粥樣斑塊面積％均值最低，低于LMLT組及VE組，差異有顯著性，其主動(dòng)脈竇動(dòng)脈粥樣斑塊面積(15.