APN、TNF-α、IL-6與人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊關(guān)系的研究.pdf

1、研究背景：
　　腦卒中是目前危害人類生命和健康最嚴(yán)重的疾病之一。近年來(lái)，隨著社會(huì)環(huán)境和國(guó)民起居飲食結(jié)構(gòu)的變化，腦卒中發(fā)病率逐年增高?；仡櫲珖?guó)第三次死因抽樣調(diào)查統(tǒng)計(jì)，腦卒中已經(jīng)躍居為第一位死亡原因。據(jù)統(tǒng)計(jì)，缺血性腦卒中占腦血管病的75％～90％，而頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生、發(fā)展及不穩(wěn)定性是引起缺血性腦卒中的重要危險(xiǎn)因素。然而，目前導(dǎo)致人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及其不穩(wěn)定性的相關(guān)基因尚不清楚，且尚未發(fā)現(xiàn)能夠反映頸動(dòng)脈血管炎癥反應(yīng)的特異性

2、較高標(biāo)志物。因此，尋找導(dǎo)致人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)生、發(fā)展及不穩(wěn)定的相關(guān)基因及特異性較高標(biāo)志物，盡早采取相應(yīng)干預(yù)措施顯得尤為重要。大量研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展，以及粥樣硬化斑塊破裂并發(fā)血栓形成、栓子脫落的所有階段均具有重要作用。脂聯(lián)素(APN)為一種脂肪源性血漿激素蛋白，具有抗炎作用。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)在炎癥反應(yīng)中分別起著關(guān)鍵及核心調(diào)節(jié)作用。因此，APN、TNF-α、IL-6均可能在人

3、頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生、發(fā)展及穩(wěn)定性方面起著一定的作用。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于APN基因在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化方面已有一些研究，但APN、TNF-α、IL-6與人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的關(guān)系研究報(bào)道較少。
　　目的：
　　本研究通過(guò)檢測(cè)APN在人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組織和人腸系膜上動(dòng)脈的表達(dá)變化，以及測(cè)定TNF-α、IL-6在人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組及健康對(duì)照組血清中的含量，來(lái)探討APN、TNF-α、IL-6與人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生、發(fā)展

4、以及穩(wěn)定性的關(guān)系。
　　方法：
　　收集48例人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組（A組）;根據(jù)頸動(dòng)脈CTA檢查結(jié)果將人頸動(dòng)脈斑塊標(biāo)本分為軟斑塊組(A1，n=16)，混合斑塊組(A2，n=16)，硬斑塊組(A3，n=16)。收集25例人腸系膜上動(dòng)脈標(biāo)本作為標(biāo)本對(duì)照組（B組,n=25）。收集25例體檢健康者作為健康對(duì)照組（C組,n=25）。
　　1.采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptase.po

5、lymerase chain reaction，RT-PCR)檢測(cè)48例人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊標(biāo)本（軟斑塊16例、混合斑塊16例、硬斑塊16例）和25例人腸系膜上動(dòng)脈標(biāo)本中APNmRNA的表達(dá)水平。
　　2.采用Westernblotting的方法檢測(cè)48例人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊標(biāo)本（軟斑塊16例、混合斑塊16例、硬斑塊16例）和25例人腸系膜上動(dòng)脈標(biāo)本中APN蛋白的表達(dá)水平。
　　3.采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-link

6、ed immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)48例人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊標(biāo)本（軟斑塊16例、混合斑塊16例、硬斑塊16例）和25例體檢健康者血清中TNF-α、IL-6水平。
　　4.應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組間血清TNF-α、IL-6水平及APNmRNA及蛋白表達(dá)水平均采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn);頸動(dòng)脈斑塊組APN蛋白表達(dá)水平與血清TNF-α、IL-6水平之間相關(guān)性采

7、用Pearson相關(guān)分析方法;各組間一般臨床資料比較采用x2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.APNmRNA及蛋白的表達(dá)水平
　　頸動(dòng)脈斑塊組APNmRNA及蛋白表達(dá)水平較標(biāo)本對(duì)照組明顯下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);軟斑塊組APNmRNA及蛋白表達(dá)水平較硬斑塊組顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.各組血清中TNF-α、IL-6水平比較
　　頸動(dòng)脈斑塊組血清TNF-

8、α、IL-6水平較健康對(duì)照組均明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。軟斑塊組血清TNF-α、IL-6水平較硬斑塊組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.TNF-α水平與IL-6水平相關(guān)性分析
　　Pearson相關(guān)性分析顯示:頸動(dòng)脈斑塊組血清中TNF-α水平與IL-6水平呈正相關(guān)（P＜0.05）。
　　4.APN蛋白表達(dá)水平與TNF-α水平相關(guān)性分析
　　Pearson相關(guān)性分析顯示:頸動(dòng)脈

9、斑塊組血清中TNF-α水平與APN蛋白表達(dá)水平呈明顯的負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　5.APN蛋白表達(dá)水平與IL-6水平相關(guān)性分析
　　Pearson相關(guān)性分析顯示:頸動(dòng)脈斑塊組血清中IL-6水平與APN蛋白表達(dá)水平呈明顯的負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.APN具有抗人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及穩(wěn)定粥樣硬化斑塊的作用。
　　2.TNF-α與IL-6相互作用，共同促進(jìn)了人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，誘