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文檔簡介
1、微膠囊疫苗是一種運用可降解生物材料和微膠囊化技術改進現有疫苗的劑型和投遞方式,從而保護抗原、簡化接種程序、增強免疫效果的新型可控緩釋疫苗。因此,進行病毒疫苗微膠囊化的研究,將有望克服傳統(tǒng)疫苗免疫原性弱、體內降解和消除快、生物利用度低的不足,更有效地預防和控制病毒性傳染病。 本研究分別選擇滅活SARS冠狀病毒、乙型肝炎疫苗、轉染SARS冠狀病毒N蛋白和Flt3配體基因編碼序列的基因工程細胞和質粒DNA作為全細胞疫苗、蛋白亞單位疫苗
2、、抗原工程疫苗和DNA疫苗的模型,應用微膠囊化技術對它們進行了劑型改換;在對微膠囊載體材料及制備方法進行研究的基礎上,初步建立了病毒疫苗微膠囊化的技術平臺,并通過動物免疫實驗評價了疫苗微膠囊化后的綜合免疫效果。 研究工作主要分為四個部分: 第一部分采用膜乳化-液中干燥法,以可生物降解的合成高分子材料單甲氧基聚乙二醇-聚丙交酯乙交酯(MPEG-PLGA)為載體,將滅活SARS冠狀病毒微膠囊化,制備出基質型SARS微球疫苗。
3、膜乳化-液中干燥法的條件比較溫和,微膠囊化過程沒有破壞滅活SARS冠狀病毒的抗原性。小鼠免疫接種實驗證明,SARS微球疫苗滴鼻或皮下接種時,微球均可充分發(fā)揮佐劑作用,誘導出較高水平的粘膜sIgA和血清IgG抗體(p<0.01,p<0.05)。 第二部分利用商品化的乙型肝炎病毒蛋白亞單位疫苗,進行膜乳化方法制備微膠囊疫苗的技術參數和載體材料的研究,并通過動物接種實驗評價微膠囊疫苗的免疫效果。結果表明,微膠囊的平均粒徑與SPG膜的孔
4、徑成正比,雙親性嵌段共聚物材料對疫苗的包載率較高。小鼠免疫接種實驗同樣證明了乙型肝炎微球疫苗在誘導粘膜和循環(huán)抗體方面的優(yōu)越性(p<0.05)。 第三部分通過靜電液滴技術,分別以轉染SARS冠狀病毒N蛋白基因和Flt3配體基因編碼序列的基因工程細胞為囊芯,天然聚電解質海藻酸鈉和殼聚糖為囊膜,制備微囊化基因工程細胞,并進行小鼠腹腔移植實驗。研究結果顯示,海藻酸鈉-殼聚糖-海藻酸鈉微膠囊具有選擇通透性,微囊化基因工程細胞能夠作為可溶性
5、蛋白產物在體內生產和釋放的生物平臺,提高基因免疫的安全性和可控性,并可能作為抗原工程疫苗功能評價的模型系統(tǒng)。將轉染SARS冠狀病毒N抗原基因的微囊化細胞與Flt3配體基因轉染的微囊化細胞聯合使用可以提高小鼠樹突狀細胞和細胞毒性T細胞的數量,增強小鼠的細胞免疫功能。 第四部分根據超分子自組裝的原理,將以綠色熒光蛋白為篩選標志的真核表達質粒pGFP與人工合成的陽離子多聚物在水介質中組裝成具有核殼結構的納米粒(亞微膠囊),進行細胞轉染
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