多囊卵巢綜合征患者血漿降鈣素基因相關(guān)肽水平變化及其病理意義.pdf

1、研究背景：
　　 多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是一種女性生殖功能障礙與代謝異常并存的內(nèi)分泌紊亂綜合征，臨床表現(xiàn)主要為高雄激素血癥、稀發(fā)或無(wú)排卵、雙側(cè)卵巢多囊樣改變。除此之外，PCOS患者還兼有胰島素抵抗(insulin resistance，IR)、肥胖、黃體生成素(luteinizing hormone，LH)/卵泡刺激素(folliclestimulating hormone

2、，F(xiàn)SH)比值倒置等表現(xiàn)。
　　 降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）是由37個(gè)氨基酸組成的小分子多肽，由降鈣素基因選擇性剪切編碼后合成。CGRP主要在感覺(jué)神經(jīng)元合成，隨著感覺(jué)神經(jīng)的分布釋放到其支配的臟器，特異性地與CGRP受體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。CGRP在神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)均有生物學(xué)效應(yīng)，主要體現(xiàn)在皮膚以及內(nèi)臟的痛覺(jué)產(chǎn)生與傳遞過(guò)程，促進(jìn)某些炎性遞質(zhì)

3、釋放，舒張血管平滑肌，并涉及胰島素抵抗和肥胖。CGRP在生殖系統(tǒng)的研究較少，目前僅知CGRP抑制子宮肌層收縮，調(diào)節(jié)子宮血流。但CGRP對(duì)卵巢的功能是否具有調(diào)節(jié)作用仍不清楚。有報(bào)道CGRP免疫反應(yīng)陽(yáng)性的神經(jīng)纖維在大鼠卵巢內(nèi)有分布，且在脫氫表雄酮誘導(dǎo)的PCOS大鼠模型，其卵巢內(nèi)CGRP免疫反應(yīng)陽(yáng)性的神經(jīng)纖維高于對(duì)照組。這些研究提示，CGRP可能在PCOS疾病的發(fā)生、發(fā)展中起作用。
　　 PCOS患者不孕的原因之一是卵子成熟障礙。卵母

4、細(xì)胞的成熟受多因素調(diào)控，其中環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate，cAMP)是主要的卵母細(xì)胞成熟抑制因子。研究表明，某些促進(jìn)cAMP的合成或抑制cAMP的降解的物質(zhì)均能使卵母細(xì)胞的成熟停滯。已知CGRP與其受體特異性結(jié)合后，受體與G蛋白耦合，通過(guò)激活腺苷酸環(huán)化酶，使細(xì)胞內(nèi)cAMP含量增加，而cAMP在生殖系統(tǒng)可抑制卵母細(xì)胞的成熟。故而我們推測(cè)，CGRP可能影響卵母細(xì)胞的成熟，進(jìn)而導(dǎo)致PCOS患者排卵障

5、礙。
　　 本研究擬探討與排卵正常的對(duì)照婦女相比，PCOS患者血漿CGRP的含量變化，并在PCOS患者中分析胰島素抵抗、體重指數(shù)(body mass index，BMI)、LH/FSH和睪酮(testosterone，T)與血漿CGRP水平的相關(guān)性。同時(shí)在培養(yǎng)的卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞，外源性應(yīng)用CGRP處理，觀察卵母細(xì)胞成熟率，以及細(xì)胞內(nèi)cAMP和細(xì)胞上清中雌二醇(estradiol，E2)和T的含量變化。
　　 方法：

6、r>　　 選取2009年7月至2011年8月在我院門(mén)診接受助孕治療的患者318例。其中正常對(duì)照組103例，滿足以下條件:(1)年齡:21-38歲之間;(2)平均月經(jīng)周期在28±3天，有規(guī)律排卵;(3)不孕原因?yàn)?男方因素接受輔助生殖治療。PCOS患者215例，滿足以下條件:(1)年齡:21-38歲之間;(2)月經(jīng)不規(guī)則至閉經(jīng)，平均月經(jīng)周期在2-3個(gè)月，臨床診斷為PCOS。兩組均于月經(jīng)的第2-5天患者空腹抽血，檢測(cè)血漿CGRP以及血漿F

7、SH、LH、E2和睪酮水平，分析這些參數(shù)與血漿CGRP水平的相關(guān)性。215例PCOS患者進(jìn)行口服糖耐量實(shí)驗(yàn)和胰島素釋放實(shí)驗(yàn)，測(cè)定穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(homeostasis model assessment-insulin resistance, HOMA-IR)、胰島素曲線下面積(area under the curve of insulin，AUC-insulin)和葡萄糖曲線下面積(area under the curve of

8、 glucose，AUC-glucose)，分析胰島素抵抗與CGRP的相關(guān)性。
　　 收集6周齡健康昆明種雌性小鼠卵巢，觀察CGRP在卵巢組織的表達(dá)。收集卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(cumulus oocyte complexes，COCs)，外源性給予不同濃度CGRP(0，10-10，10-9，10-8M)培養(yǎng)24小時(shí)后觀察生發(fā)泡破裂(germinal vesicle breakdown，GVBD)率和第一極體(first polar

9、 body，PBI)排出率。收集黃素化的人卵巢顆粒細(xì)胞，檢測(cè)CGRP受體mRNA表達(dá);以不同濃度CGRP(0，10-10，10-9，10-8M)培養(yǎng)24小時(shí)，觀察細(xì)胞內(nèi)cAMP和上清液中E2和T的含量變化。
　　 結(jié)果：
　　 (1)對(duì)照人群與PCOS患者在年齡、身高和血漿E2水平間無(wú)差異，F(xiàn)SH水平對(duì)照人群高于PCOS患者（6.98±0.16 vs6.51±0.10 mIU/ml，P＜0.01），而體重（50.7±0.

10、5 vs56.3±0.6 kg），BMI（20.46±0.21vs22.73±0.22 kg/m2），血漿LH水平(4.57±0.20 vs8.48±0.37mIU/ml)，LH/FSH比值（0.66±0.03 vs1.29±0.05），血漿T水平(0.34±0.16 vs0.43±0.01 ng/ml)對(duì)照人群均低于PCOS患者（P＜0.01）。
　　 (2) PCOS患者血漿CGRP水平顯著高于對(duì)照人群（6.14±0.29

11、ng/Lvs4.48±0.25 ng/L，P＜0.05）。
　　 (3) PCOS患者血漿CGRP濃度與HOMA-IR，AUC-insulin，AUC-glucose顯著正相關(guān)。對(duì)照人群、PCOS患者及所有受試者中血漿CGRP水平與血漿LH/FSH比值、T水平顯著正相關(guān)，而與BMI無(wú)明顯相關(guān)性。
　　 (4)以LH/FSH的比值分層，在PCOS患者中隨著LH/FSH比值的升高，CGRP水平亦明顯增高，LH/FSH＞2的患

12、者同LH/FSH＜1的患者比較，其CGRP水平有顯著性差異;以BMI=24分層，PCOS患者中BMI＜24及BMI≥24的患者間CGRP水平無(wú)顯著性差異。
　　 (5)人顆粒細(xì)胞表達(dá)CGRP受體mRNA。小鼠卵巢組織有CGRP表達(dá)，以卵母細(xì)胞及卵巢間質(zhì)組織表達(dá)量較多。CGRP可濃度依賴(lài)性地抑制小鼠卵母細(xì)胞生發(fā)泡破裂和第一極體排出。CGRP可濃度依賴(lài)性地升高人顆粒細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度以及細(xì)胞上清液中T和E2水平。
　　 結(jié)論