CD4+iNKT細胞在實驗性過敏性鼻炎發(fā)病中的作用.pdf

1、過敏性鼻炎是一種常見病,多發(fā)病,在全世界范圍來說其發(fā)病率為10％～25％,且呈不斷上升趨勢。盡管過敏性鼻炎不是一種致命的疾病,但是也明顯地影響患者的生活質(zhì)量。在一些國家,甚至成為一個社會問題。過敏性鼻炎的發(fā)病機制中傳統(tǒng)的“Th1-Th2失衡理論”還有很多現(xiàn)象無法解釋,很多證據(jù)表明Th1-Th2的反應失衡很可能只不過是過敏性疾病發(fā)病的冰山一角。NKT細胞的發(fā)現(xiàn),也許會對過敏性疾病的發(fā)病機制有著有著進一步深入的了解。
　　NKT細胞是

2、一類特殊的細胞亞群,它既表達T細胞的表面標志如TCR,CD3等,也表達NK細胞表面的一些特異的分子如,NK1.1(NKR-PIC),CD161,CD16,CD122等。研究者發(fā)現(xiàn),NKT細胞存在不同的分布,NKT細胞可迅速分泌大量具有免疫調(diào)節(jié)作用的細胞因子,如IL-4,IFN-γ,IL-10和IL-13,調(diào)節(jié)體內(nèi)的免疫反應。
　　α-Galcer是一種脂類物質(zhì),有研究表明α-Galcer可以刺激NKT細胞增值,產(chǎn)生大量的細胞因子參

3、與免疫調(diào)節(jié),因此及它的類似糖脂類物質(zhì)已經(jīng)逐漸引起人們的關注,廣泛運用腫瘤、感染性疾病及自身免疫疾病的相關研究。但目前為止尚未見NKT和過敏性鼻炎的關系的研究,本實驗即來了解在實驗性過敏性鼻炎發(fā)病過程中NKT細胞浸潤情況,以及通過α-Galcer對NKT的影響途徑來實現(xiàn)多過敏性鼻炎的影響,以便進一步確認CD4+iNKT細胞在過敏性疾病中所擔當?shù)慕巧?br>　　目的:探討過敏性鼻炎發(fā)病過程中CD4+iNKT細胞浸潤情況以及α-Galcer

4、所介導的CD4+iNKT細胞調(diào)控對過敏性鼻炎發(fā)病的影響。
　　方法:將45只C57BL/6小鼠隨機分為A:過敏性鼻炎組,B:生理鹽水對照組,C:α-Galcer干預組。A組以卵清白蛋白(OVA)致敏建立過敏性鼻炎模型,B組以生理鹽水代替卵清白蛋白(OVA)作為空白對照,C組在過敏性鼻炎造模的最后一周,腹腔連續(xù)注射α-Galcer進行干預。比較各組小鼠過敏性鼻炎癥狀評分,鼻粘膜嗜酸性粒細胞(EOS)計數(shù),鼻粘膜組織形態(tài),免疫酶標技術

5、檢測各組鼻粘膜CD4+iNKT細胞的浸潤,流式細胞技術(Flow Cytometry,FCM)檢測鼻腔灌洗液中的CD4+iNKT細胞,RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)檢測各組鼻腔灌洗液的Vα14的基因表達,ELISA檢測各組血清IgE水平以及鼻腔灌洗液的IL-4和IFN-γ水平。運用SPSS11.5統(tǒng)計學軟件進行分析。
　　結果:1.癥狀評分:A組評分(

6、7.3±1.0),較B組(0.7±0.6)C組(3.9±1.1)明顯增高(p＜0.01),B組評分明顯低于C組(p＜0.01)。2.嗜酸性粒細胞計數(shù):A組(7.5±1.2)較B組(0.4±0.5)C組(1.53±0.74)明顯提高(p＜0.01),C組高于B組(p＜0.05)。3.鼻粘膜組織形態(tài):HE染色見A組纖毛結構大量脫落,組織水腫,小血管增生,粘膜上皮下固有層嗜酸性粒細胞浸潤,淋巴細胞浸潤;B組C組均無明顯嗜酸性粒細胞浸潤,纖毛結

7、構完整。4.鼻粘膜CD4+iNKT細胞浸潤情況:A組粘膜下有多量的CD4+,NK1.1染色細胞,即CD4+iNKT細胞;B組僅見少量的CD4+細胞。5.鼻腔灌洗液流式細胞分析:CD4+iNKT細胞陽性率A組(72.6％±0.0789)C組(83.7％±0.0515)明顯高于BN(0.49％±0.0013)(p＜0.01),C組高于AN(p＜0.05)。6..鼻腔灌注液Vα14mRNA表達:A組和C組均顯現(xiàn)特異性條帶,B組未見特異性條帶顯

8、現(xiàn)。積分光密度:A組(0.3343±0.1585)較C組(0.3521±0.1239)無明顯統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。7.血清總IgE濃度(ng/ml):A組(116.13±10.70)明顯高于B組(26.13±4.19:)C組(73.00±4.34)(p＜0.01),C組明顯高于B組(p＜0.01)。8.鼻腔灌洗液IL-4濃度(peJma):A組(238.4±22.0)明顯高于BN(7.6±1.5)和C組(15.5±1.6)(p＜0

9、.01),C組明顯高于B組(p＜0.01)。8.鼻腔灌洗液IFN-γ濃度(pg/ml):A組(31.6±6.9)明顯低于B組(132.2±13.2)和C組(162.8±12.3)(p＜0.01),C組高于B組(p＜0.05)。
　　結論:1.應用OVA及C57BL/6鼠建立過敏性鼻炎的動物模型方法簡便、經(jīng)濟,模型致敏效果確切,出現(xiàn)典型的變應性炎癥表現(xiàn),顯示造模成功。2.過敏鼻炎小鼠鼻腔有大量的CD4+iNKT細胞浸潤,其數(shù)量遠遠超