化瘀理肺方對大鼠肺纖維化的保護作用研究.pdf

1、目的：
　　 1.建立大鼠肺間質纖維化模型；2.觀察化瘀理肺方對大鼠肺間質纖維化的治療作用；3.探討化瘀理肺方對大鼠肺間質纖維化模型肺組織勻漿中TNF-α、IFN-γ、IL-4含量的影響；4.對比化瘀理肺方與氫化可的松琥珀酸鈉對大鼠肺間質纖維化模型肺組織細胞形態(tài)學及肺組織勻漿中TNF-α、IFN-γ、IL-4含量的影響的差異。
　　 方法
　　 健康雄性wistar大鼠84只,體重180～220g,購于山東中醫(yī)藥

2、大學實驗動物中心(生產許可證號SCX魯20050015)。隨機分為4組,模型組、中藥組、激素組與對照組各21只,用1％戊巴比妥鈉(35mg.kg-1)腹腔注射麻醉后,將大鼠仰臥位固定于實驗臺上,將頭和四肢固定,用開口器固定口腔,拉出舌,用壓舌板壓舌腹,在額鏡直視下,在大鼠吸氣瞬間,迅速將帶接頭的硬脊膜外麻醉導管插入氣管約1～2厘米,同時與1ml注射器相連,可見導管內液體隨大鼠呼吸而波動,前三組大鼠氣管內一次性灌注0.4％博萊霉素0.25

3、mL(5mg.kg-1),第4組注入生理鹽水0.25ml作為正常對照組,注入后立即旋轉大鼠,使藥液在肺內均勻分布。次日開始,對照組與模型組每天給予生理鹽水2mL/只灌胃,中藥組每天給予化瘀理肺方藥物17190mg.kg-1灌胃,激素組每天給予氫化可的松琥珀酸鈉25mg.kg-1腹腔注射。給藥過程中觀察動物的一般情況:動物活動、精神狀態(tài)、皮毛、體型、攝食、糞便等。4組分別于第7、14、28天隨機處死7只。具體方法如下:用1％戊巴比妥鈉(3

4、5mg.kg-1)腹腔注射,麻醉后將大鼠仰臥固定,沿腹中線逐層切開腹壁,腹主動脈放血處死,打開胸腔,取出并分離肺組織,觀察各組大鼠雙肺外觀情況,取右肺,放入冷生理鹽水中漂洗除去浮血,濾紙吸干后,在冰浴上剪成碎塊,制成10％肺勻漿,3000r.min-1離心10min后取上清液于-70℃冰箱保存,統(tǒng)一測定TNF-α、IFN-γ、IL-4,左肺浸于10％福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋、切片,HE染色,用光鏡觀察。
　　 結果
　　

5、 1.各組大鼠一般情況觀察:進入結果分析的大鼠有84只,正常對照組大鼠無死亡,活動良好,體格健壯,營養(yǎng)好,皮毛光亮、致密；模型組均有不同程度的咳嗽,呼吸困難,飲食差,體重下降,體格瘦小,精神萎靡,活動量明顯下降；激素組造模后前期表現(xiàn)與模型組相似,治療1周后稍有好轉,但活動量、消瘦未見明顯改善；中藥組開始表現(xiàn)也與模型組相似,治療后進食、體格、活動量均明顯好轉,精神狀態(tài)較好。
　　 2.肺組織大體觀察:對照組雙肺外觀無異常,肺葉輪

6、廓清晰,呈粉紅色,表面光滑,彈性良好；模型組第7天雙肺表面可見散在斑點狀出血,肺體積增大,14天雙肺體積縮小,彈性差,仍可見散在出血點,并可見大小不等的散在結節(jié)狀改變,雙肺呈灰白色,第28天雙肺灰白色,體積明顯縮小且硬度增加,肺表面可見大量結節(jié)樣改變；激素組與模型組相似,部分肺葉表面光滑,局部見大小不等結節(jié)樣改變,邊緣有點狀出血,部分肺葉體積縮小；中藥組與對照組相近,部分呈暗紅色,偶見大小不等結節(jié)樣改變,邊緣有點狀出血及部分肺葉體積縮小

7、。
　　 3.肺系數(shù)的比較:模型組、中藥組、激素組第7、14天和28天時肺系數(shù)均顯著大于對照組(P<0.01),中藥組、激素第7、14、28時肺系數(shù)均小于模型組(P<0.01),中藥組于第7、14天和第28天肺系數(shù)均小于激素組(P<0.01)。
　　 4.肺組織光鏡病理學觀察:對照組各時間段大鼠肺組織大多數(shù)結構清晰,均未出現(xiàn)明顯形態(tài)學改變；模型組第7天炎癥明顯,可見大量炎性細胞浸潤,并可見纖維細胞增多,第14天雙肺大量炎

8、性細胞浸潤,肺泡間隔增寬并可見明顯增多的成纖維細胞,膠原纖維沉積,肺泡變形,第28天可見肺部炎癥明顯減輕但可見大量成纖維細胞與膠原基質,肺泡壁明顯增厚可見部分出現(xiàn)萎縮,肺泡間隔明顯增寬,肺泡大部分消失,肺部炎性細胞浸潤情況較前有所減輕；激素組肺泡炎的程度同模型組比較有明顯的減輕(P<0.01或P<0.05),肺纖維化程度與模型組比較有所減輕,但在第28天時不明顯(P>0.05)。中藥組肺纖維化的程度均較模型組明顯減輕(P<0.01),第

9、28天時同激素組比較也有明顯的減輕(P<0.05),肺泡炎癥程度在各期均較模型組減輕(P<0.01或P<0.05),但肺泡炎癥與纖維化同對照組比較仍較嚴重(P<0.01或P<0.05)。
　　 5.肺組織勻漿中TNF-α、IFN-γ、IL-4含量變化:模型組、中藥組及激素組肺組織勻漿中TNF-α含量于第7、14天時比正常對照組均顯著升高(P<0.01或P<0.05),中藥組和激素組明顯低于模型組(P<0.01或P<0.05),差

10、異均有顯著性的統(tǒng)計學意義,而中藥組和激素組差異無統(tǒng)計學意義；第28天時各組大鼠肺組織TNF-α含量差異均無統(tǒng)計學意義,第7、14和28天時,對照組、模型組、中藥組、激素組TNF-α含量均稱遞減趨勢,對照組、中藥組與激素組組內差異均無統(tǒng)計學意義,模型組第7天與第14天比較差異無統(tǒng)計學意義,模型組于第7天和28天、第14天與第28天比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)。模型組肺組織勻漿中IFN.Y含量于第7、14、28天時顯

11、著低于對照組(P<0.01或P<0.05),激素組于第7、14、28天時明顯高于模型組(P<0.01或P<0.05),而低于對照組(P<0.01或P<0.05),中藥組于第7天時與對照組差異無統(tǒng)計學意義,但第14、28天時,低于對照組(P<0.01或P<0.05),差異有統(tǒng)計學意義,中藥組與第7、14天時明顯高于模型組(P<0.01或P<0.05),于第28天時差異無統(tǒng)計學意義,中藥組與激素組于第7、14及28天時差異均無統(tǒng)計學意義,第

12、7、14和28天時,對照組、模型組、中藥組與激素組中IFN-γ含量均呈下降趨勢,對照組、、中藥組與激素組組內差異均無統(tǒng)計學意義,模型組第7天與第14天比較差異無統(tǒng)計學意義,第7天和14天、第7天和28天比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)。模型組、中藥組及激素組于第7、14和28天時IL-4含量比對照組均顯著升高(P<0.01),而中藥組和激素組明顯低于模型組(P<0.01),差異均有顯著的統(tǒng)計學意義；第7天時,中藥組與

13、激素組差異無統(tǒng)計學意義,但于第14、28天時,中藥組IL_4含量均低于激素組(P<0.01),差異有統(tǒng)計學意義。第7、14和28天時,各組IL-4含量均呈遞減趨勢,正常對照組組內差異無統(tǒng)計學意義,模型組、中藥組與激素組組內差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　 結論
　　 1.化瘀理肺方和氫化可的松琥珀酸鈉均可降低BLM致大鼠肺纖維化模型的肺系數(shù)；
　　 2.化瘀理肺方對BLM致大鼠肺纖維化模型的肺泡炎和肺纖