參麥開肺散治療肺纖維化的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究旨在利用體內(nèi)、體外實驗探索參麥開肺散治療肺纖維化的作用機(jī)制。
　　方法：體內(nèi)實驗：7周齡C57BL/6小鼠，隨機(jī)分成4組：正常對照組、博萊霉素模型組、參麥開肺散組、乙酰半胱氨酸組。單次氣管灌注博萊霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化模型，造模后第10天進(jìn)行灌胃給藥治療，第21天處死小鼠。HE染色和Masson染色觀察不同組別小鼠肺組織病理學(xué)改變，Real-Time-PCR（RT-PCR）檢測小鼠肺組織中細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellu

2、lar matrix, ECM）相關(guān)基因及抗氧化基因的表達(dá)水平，Sircol assay檢測小鼠肺組織中膠原蛋白含量，Western blot檢測小鼠肺組織中蛋白質(zhì)氧化損傷產(chǎn)物3-硝基酪氨酸(3-Nitrotyrosine,3-NT)的蛋白水平。體外實驗：采用轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor-β, TGF-β）體外處理NIH/3T3成纖維細(xì)胞（5 ng/ml）以誘導(dǎo)細(xì)胞纖維化反應(yīng)，實驗分為正常對照組、

3、TGF-β組、TGF-β+參麥開肺散干預(yù)組，利用Roche公司的xCELLigence System確定參麥開肺散使用濃度，RT-PCR檢測細(xì)胞中ECM相關(guān)基因及氧化/抗氧化相關(guān)基因的表達(dá)水平，Sircol assay檢測分泌到細(xì)胞上清中膠原蛋白的含量，活性氧（Reactive oxygen species, ROS）檢測試劑盒檢測細(xì)胞中ROS水平，Western blot檢測細(xì)胞中Ⅰ型膠原蛋白、蛋白質(zhì)氧化損傷產(chǎn)物3-NT的蛋白水平及S

4、mad3蛋白磷酸化水平，熒光素酶報告基因檢測細(xì)胞中膠原啟動子區(qū)SBE活性。
　　結(jié)果：體內(nèi)實驗：與正常對照組相比，博萊霉素可明顯誘導(dǎo)小鼠肺組織纖維化的發(fā)生，ECM相關(guān)基因、膠原蛋白含量及蛋白質(zhì)氧化損傷產(chǎn)物均顯著增高，抗氧化相關(guān)基因表達(dá)水平顯著降低；而給予參麥開肺散、乙酰半胱氨酸治療后，小鼠肺纖維化得到明顯緩解，上述相關(guān)指標(biāo)接近正常水平。體外實驗：TGF-β處理NIH/3T3成纖維細(xì)胞，可明顯誘導(dǎo)細(xì)胞纖維化反應(yīng)發(fā)生：細(xì)胞中ECM相關(guān)

5、基因、氧化相關(guān)基因、膠原蛋白大量表達(dá)，蛋白質(zhì)氧化損傷產(chǎn)物3-NT、膠原啟動子區(qū)SBE活性過表達(dá)，Smad3蛋白磷酸化水平升高，TGF-β處理NIH/3T3成纖維細(xì)胞可顯著降低抗氧化基因細(xì)胞外超氧化物歧化酶（Extracellular superoxide dismutase，Ec-sod）表達(dá)；而用1mg/ml參麥開肺散干預(yù)后，上述相關(guān)指標(biāo)接近正常水平。
　　結(jié)論：參麥開肺散在體內(nèi)外纖維化模型中均可抑制膠原的合成，并且可以通過調(diào)節(jié)