定經(jīng)湯對卵巢早衰模型大鼠胃腸功能的實驗研究.pdf

1、目的：用聲-光-電復合應(yīng)激刺激法建立卵巢早衰大鼠模型，給予定經(jīng)湯進行治療，通過觀察大鼠胃肌條的收縮、胃電慢波、胃排空率、小腸推進率、胃酸、胃蛋白酶活性、ICC等，探討定經(jīng)湯對卵巢早衰模型大鼠胃腸功能的影響和調(diào)整機制。
　　方法：1.卵巢早衰大鼠模型的制備。購買一批SPF級SD雌性大鼠，體重180-220 g，適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后，每天定時用顯微鏡觀察陰道涂片，選擇有2個連續(xù)正常動情周期的大鼠用于造模實驗，其余淘汰。篩選后的大鼠隨機分

2、為正常組和卵巢早衰模型組，每組20只，共40只。主要刺激方法：采用聲-光-電復合應(yīng)激刺激大鼠（聲、光同時刺激10s，再加電擊足底，聲-光-電3種刺激同時維持60 s后聲-光刺激停止，電擊足底維持5s，總計時間75s。每日進行3次，1h內(nèi)完成）。附加應(yīng)激方法：禁食24h，禁水24h，電擊足底，4℃冷水游泳5min，通宵照明，夾尾1min，45℃烘箱熱烘5min，每天隨機給予一種刺激。連續(xù)造模20d，通過觀察大鼠的體征，動情周期，組織形態(tài)學

3、，促卵泡成熟激素（FSH）和雌二醇（E2）水平的變化，判斷造模是否成功。
　　2.定經(jīng)湯對大鼠胃竇環(huán)行平滑肌收縮的影響。將20只雌性大鼠隨機分為正常組（10只）和模型組（10只），正常組正常飼養(yǎng)，模型組按照第一部分的方法造模。造模20 d后，制備大鼠胃竇環(huán)形肌，用MP150生物信號采集系統(tǒng)同時記錄安置在各恒溫灌流肌機槽中的胃平滑肌條的收縮活動，觀察正常組和模型組胃肌條收縮幅度，頻率的差異。將56只雌性大鼠進行造模，連續(xù)造模20 d

4、后，將大鼠隨機分為全方組、主藥對組、無主藥對組、疏肝組和補腎組、無鈣組和阿托品組7組，每組8只。給予各組大鼠高、中、低3個濃度相應(yīng)的藥物，觀察定經(jīng)湯及其拆方對卵巢早衰模型大鼠胃竇平滑肌收縮的影響，確定最佳濃度和最佳配方，后續(xù)實驗均用此配方。
　　3.定經(jīng)湯對大鼠胃電慢波的影響。將30只雌性大鼠隨機分為正常組、模型組、給藥組，每組10只。從造模的第一天開始，正常組和模型組灌胃生理鹽水，給藥組用定經(jīng)湯灌胃。連續(xù)20 d后，用美國BIO

5、PAC公司MP150多導生理記錄儀以及AcqKnowledge軟件記錄各組大鼠胃電慢波的胃電慢波頻率、峰峰值等指標。
　　4.定經(jīng)湯對大鼠胃排空和小腸推進率的影響。將30只雌性大鼠隨機分為正常組、模型組、給藥組，每組10只。從造模的第一天開始，正常組和模型組灌胃生理鹽水，給藥組用定經(jīng)湯灌胃。連續(xù)造模20 d，大鼠禁食（不禁水、藥）24 h，正常組和模型組灌胃生理鹽水，給藥組灌胃定經(jīng)湯，30 min后灌服2％葡聚糖藍2000溶液，每

6、只0.4 ml。再經(jīng)20 min后頸推脫臼處死動物，開腹取全部胃腸，測定胃排空和小腸推進率。
　　5.定經(jīng)湯對大鼠胃酸和胃蛋白酶活性的影響。將30只雌性大鼠隨機分為正常組、模型組、給藥組，每組10只。從造模的第一天開始，正常組和模型組灌胃生理鹽水，治療組用定經(jīng)湯灌胃。實驗20 d后，將大鼠禁食不禁水24 h，治療組用定經(jīng)湯灌胃，正常組和模型組用生理鹽水灌胃，1 h后，用烏拉坦麻醉大鼠于腹部做切口，結(jié)扎幽門與十二指腸連接處，正常組和

7、模型組由結(jié)扎部位向胃注入生理鹽水，治療組注入定經(jīng)湯，進行胃酸和胃蛋白酶活性實驗。
　　6. ICC超微結(jié)構(gòu)的觀察。打開大鼠胃腔，取大鼠胃組織一塊。將大鼠胃標本放在裝有涼Krebs液的容器內(nèi)，仔細去除胃內(nèi)容物，然后將組織平鋪于濾紙上，立即放入3%戊二醛固定，2%PBS沖洗，再用1%鋨酸固定2 h，2%PBS沖洗，乙醇、丙酮梯度脫水，通過浸透，樹脂聚合，精確定位,，70 nm超薄切片，1%醋酸鈾、枸櫞酸鉛染色，置透射電鏡下觀察正常組、

8、卵巢早衰模型組、給藥組大鼠胃ICC超微結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：1.造模后，與正常組進行外在體征對比，模型組大鼠表現(xiàn)為體重增加緩慢，活動減少，反應(yīng)遲鈍，體毛黯淡無光澤。大便性狀發(fā)生改變，飲食量減少等癥狀；模型組與正常組相比，模型組促卵泡成熟激素（FSH）水平明顯升高，而雌二醇（E2）水平則明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P﹤0.01）；卵巢形態(tài)學上，正常組大鼠卵巢外觀顏色紅潤，卵泡腔內(nèi)卵子生長良好顆粒細胞豐富，有排卵后的出血點。而模型大鼠卵

9、巢外觀顏色淡紅，卵泡內(nèi)為一空泡，無卵子生成，顆粒細胞少，無排卵后的出血點或出血點少。
　　2.與正常組相比，模型組的胃竇平滑肌收縮頻率低，幅度較小，差異具有統(tǒng)計學意義（P﹤0.01）；定經(jīng)湯及其拆方對卵巢早衰模型大鼠胃竇平滑肌收縮有明顯的增強作用，其中高濃度的無主藥組作用最明顯。與給藥前對比，全方組和無主藥組胃竇肌條收縮力在高、中、低3個濃度水平都有明顯增強（P﹤0.01或P﹤0.05）；主藥組、補腎組和疏肝組在高濃度或中濃度水平

10、有明顯增強（P﹤0.05）；與全方組對比，無鈣組和阿托品組給藥后收縮率明顯下降（P﹤0.01或P﹤0.05）。
　　3.模型組大鼠的胃電慢波峰峰值和頻率最小，圖形紊亂。模型組與正常組、給藥組均存在顯著性差異（P﹤0.01），說明定經(jīng)湯能抑制卵巢早衰模型大鼠的胃電慢波節(jié)律紊亂，促進胃平滑肌收縮；
　　4.模型組胃排空和小腸推進率顯著低于正常組和給藥組（P﹤0.01），定經(jīng)湯能促進卵巢早衰模型大鼠的胃排空和小腸推進率。
　

11、　5.模型組胃酸含量和胃蛋白酶活力顯著低于正常組和治療組（P﹤0.01），定經(jīng)湯有促進胃酸分泌，促進胃蛋白酶活性的作用。
　　6.通過透射電鏡觀察，與正常組相比，模型組大鼠胃的ICC總體數(shù)目不多，超微結(jié)構(gòu)較模糊，細胞器明顯減少，胞質(zhì)溶解，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴張、線粒體明顯減少、腫脹等，說明卵巢早衰模型大鼠的胃ICC受損。觀察給藥組后，發(fā)現(xiàn)定經(jīng)湯對卵巢早衰模型大鼠胃ICC有修復作用。
　　結(jié)論：1.復合心理刺激建立的卵巢早衰動物模型和

12、臨床卵巢早衰患者的癥狀基本相似，說明此方法可行，同時也表明本實驗造模成功。
　　2.定經(jīng)湯能促進胃竇平滑肌條的收縮作用，其機制可能經(jīng)由膽堿能的M受體介導，并通過Ca2+通道發(fā)揮作用。
　　3.定經(jīng)湯能抑制卵巢早衰模型大鼠的胃電慢波節(jié)律紊亂，增加胃電慢波的頻率和峰峰值。
　　4.定經(jīng)湯能促進大鼠的胃排空率和小腸推進率，增強胃腸動力。
　　5.定經(jīng)湯具有促進胃酸分泌，增加胃液分泌量，促進胃蛋白酶活性的作用。