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文檔簡介
1、目的:檢測MG患者PBMCs中miRNA-146a的表達水平;研究抑制miRNA-146a后對Torpedo AchRα146-162(Tα)肽段刺激后的小鼠AchR特異性B細胞活化的影響及可能機制，探討miRNA-146a在MG中的作用，尋找抑制MG中AchR特異性免疫反應的治療新方法。
方法:以熒光定量PCR檢測MG患者組及健康對照組PBMCs中miR-146a的表達水平。合成miR-146a的反義互補鏈Antagom
2、iR-146a片段作為抑制劑，并以結構相似的無意義片段作為對照物;免疫磁珠分選小鼠脾臟B、T細胞并測定細胞純度及活性;脂質體HiPerFect負載FITC標記的AntagomiR-146a轉染B細胞，流式細胞術檢測轉染效率;設置空白組、Tα組、Tα+抑制劑組、Tα+對照組，將T、B細胞按照1∶3比例共培養(yǎng)2天后，除空白組外均予以Tα刺激，同時Tα+抑制劑組予以AntagomiR-146a、Tα+對照組予以對照物干預。干預后第3天分選B細
3、胞，熒光定量PCR檢測miR146a的表達水平、流式檢測細胞表面標志CD40、CD80、CD86的表達水平;Western Blot檢測TLR4、NF-κB及Bcl-2的表達水平。
結果:1.MG患者組較健康對照組PBMCs中miR-146a的表達水平顯著增高(P=0.004)。
2.分選后B、T細胞純度分別為97.1％、96.7％，增殖反應示細胞活性正常，脂質體HiPerFect負載AntagomiR-14
4、6a轉染B細胞的結合率達65.8％，滿足實驗要求。
3.Tα組較空白組B細胞miR-146a表達水平顯著增高(P＜0.001);Tα+抑制劑組較Tα組miR-146a表達水平顯著降低(P＜0.001);Tα+對照組與Tα組miR-146a表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P=0.948)。
4.Tα組較空白組B細胞CD40、CD80、CD86表達水平顯著增高;Tα+抑制劑組較Tα組CD40、CD80表達水平顯著降低，
5、CD86表達無明顯差異;Tα+對照組與Tα組CD40、CD80及CD86表達水平無明顯差異。
5.Tα組較空白組B細胞TLR4、NF-κB表達水平顯著增高(P＜0.001);Tα+抑制劑組較Tα組TLR4、NF-κB表達水平顯著降低(P＜0.001); Tα+對照組TLR4、NF-κB表達水平及各組間Bcl-2表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
結論:1.MG患者PBMCs中miR-146a的表達水平
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