重癥肌無力同心圓針電極單纖維肌電圖的研究.pdf

1、目的：(1)建立塵螨哮喘小鼠模型并觀察模型T-bet、GATA-3、Foxp3蛋白的表達(dá)情況.(2)探討T-bet、GATA-3、Foxp3與Th1/Th2平衡、氣道炎癥形成的關(guān)系.(3)研究CpGODN對氣道炎癥、Th1/Th2平衡的調(diào)控作用及其對T-bet、GATA-3、Foxp3蛋白表達(dá)的影響.(4)觀察吸入糖皮質(zhì)激素對哮喘氣道炎癥、Th1/Th2平衡的影響. 方法：30只雌性C57BL/6J小鼠(6-8周齡)按體重大小隨

2、機(jī)分為5組:正常對照組(A組),哮喘模型組(B組),GpCODN對照組(C組),CpGODN治療組(D組),布地奈德組(E組),每組6只.正常組用生理鹽水0.2ml,其他實(shí)驗(yàn)組用塵螨抗原/氫氧化鋁(20 μg/5mg)0.2ml于d1、d10腹腔注射致敏,CpGODN治療組每次致敏時(shí),CpGODN 20 μg與塵螨抗原混合腹腔注射,GpCODN治療對照組每次致敏時(shí),GpCODN20 μg與塵螨抗原混合腹腔注射.d17開始激發(fā),隔日一次,

3、共7次,正常組用生理鹽水50 u l滴鼻激發(fā),其余組用塵螨抗原/生理鹽水(20 u g/50u l)滴鼻激發(fā),布地奈德組每次激發(fā)前1小時(shí)霧化布地奈德混懸液30min.末次激發(fā)后24小時(shí)處死小鼠,觀察支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞百分比(EOS﹪)的變化,用酶聯(lián)免疫吸附測(ELISA)法檢測BALF中IL-4、IL-5、IL-γ、IL-10、TGF-β 1的含量變化;取肺組織作病理檢測在光鏡、電鏡下觀察小鼠氣道炎癥情

4、況;免疫組化染色觀察CpGODN對塵螨過敏性哮喘小鼠模型肺部T-bet/GATA-3表達(dá)的影響;用免疫印跡(western-blot)法檢測肺組織中T-bet、GATA-3、Foxp3蛋白的表達(dá)水平的變化. 結(jié)果：(1)BALF中的炎癥細(xì)胞:各組BALF細(xì)胞總數(shù)、EOS絕對值計(jì)數(shù)、EOS占細(xì)胞總數(shù)的百分比(EOS﹪)的比較,B組顯著高于A組(均為P<0.01);D組、E組顯著低于B組(均為P<0.01),C組顯著高于D組(均為P

5、<0.01). (2)肺組織病理改變:B組小鼠肺細(xì)織切片HE染色可見支氣管及血管周圍炎性細(xì)胞浸潤,以EOS、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞為主,支氣管上皮多處斷裂,并有基底膜增厚和平滑肌肥大增生等表現(xiàn).AB-PAS染色氣道腔內(nèi)可見大量黏液栓,杯狀細(xì)胞增生,甲苯胺藍(lán)法染色可見大量的肥大細(xì)胞及其顆粒.D組和E組的上述改變程度不一,明顯比B組的改變輕.C組比D組的改變明顯.A組則無上述表現(xiàn). (3)肺組織超微結(jié)構(gòu):電鏡下A組(正常對照組

6、)顯示正常的肺泡隔和肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,支氣管纖毛上皮細(xì)胞纖毛排列整齊;B組肺泡隔明顯增厚,炎癥細(xì)胞增多,結(jié)果(1)10位健康者分別使用CNE和SFE在伸指總肌各獲得200個(gè)動(dòng)作電位對.CNE記錄所得200個(gè)動(dòng)作電位對的平均Jiggle值為29.35±8.82us,SFE記錄所得200個(gè)動(dòng)作電位對平均Jitter值為29.00±8.52us(p=0.69).10位健康者平均Jiggle為29.16±4.64us,平均Jitter為29.0

7、0±4.50us(p=0.94).健康者沒有發(fā)現(xiàn)阻滯.健康者CNE記錄的Jiggle與SFE記錄的jitter相近,具有可比性.(2)9位重癥肌無力患者184個(gè)動(dòng)作電位對的平均Jiggle值為80.74±56.62us,平均Jitter值為81.57±50.80us(p=0.88),9位患者平均Jiggle值為81.01±16.27us,平均jitter值為81.89±17.81us(p=0.92),MG患者CNE記錄的Jiggle與S

8、FE記錄的Jitter也具有可比性. (4)10位健康者和9位重癥肌無力患者單纖維肌電圖結(jié)果見表1、表2(4)10位健康者SFE記錄的200對電位中,13對(6.50﹪)MSD(平均分類數(shù)據(jù)差,mean sorted-data difference)代替MCD(連續(xù)IPI差值的均數(shù)即連續(xù)差均值,mean consecutive difference)計(jì)算Jitter值,CNE記錄的200對電位中17對(8.50﹪)MSD代替MC

9、D計(jì)算Jiggle值:9例MG患者,SFE記錄的184對電位中,24對(13.04﹪)MSD代替MCD計(jì)算Jitter值,CNE記錄的184對電位中,56對(30.43﹪)MSD代替MCD計(jì)算Jiggle值. (5)10位健康者CNE記錄時(shí),平均放電頻率為15.61±6.37,記錄的平均電位數(shù)目為1.61±0.61;而SFE記錄時(shí),平均放電頻率為16.71±6.59,記錄的平均電位數(shù)目為1.38±0.49.CNE記錄的放電頻率低

10、于SFE,但兩者間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.08),CNE記錄的電位對多于SFE,兩者間有顯著性差異(P<0.001). (6)9例MG患者CNE記錄時(shí),平均放電頻率為13.05±3.47,記錄的平均電位數(shù)目為1.46±0.56;而SFE記錄時(shí),平均放電頻率為14.88±3.78,記錄的平均電位數(shù)目為1.33±0.47.CNE記錄的放電頻率低于SFE,兩者間差異有顯著性(P<0.001),CNE記錄的電位對多于SFE,兩者間有顯

11、著性差異(P<0.05). (7)53例重癥肌無力患者使用CNE共獲得1065對動(dòng)作電位,每對動(dòng)作電位的平均Jiggle值為67.13±58.63us,阻滯電位共131對,占12.30﹪(131/1065).53例患者的平均Jiggle值為67.15±35.05us,28例發(fā)現(xiàn)阻滯,占52.83﹪(28/53). (8)53例重癥肌無力患者中,Jiggle異常者44例,陽性率為83.02﹪(44/53);正常9例,占16

12、.98﹪(9/53).Jiggle正常的9例患者,其中8例為眼肌型重癥肌無力,1例為在疾病緩解期的全身型重癥肌無力.22例眼肌型患者,Jiggle異常14例,陽性率為63.64﹪(14/22),4例發(fā)生阻滯,占18.18﹪(4/22),阻滯電位共13對.31例全身型患者,Jiggle異常30例,陽性率為96.77﹪(30/31).24例發(fā)生阻滯,占77.42﹪(24/31),阻滯電位共118對. 結(jié)論：(1)使用CNE代替SFE