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文檔簡介
1、背景與目的:免疫排斥反應(yīng)可引起患者的移植腎喪失,目前除運用藥物等進(jìn)行抗排斥治療外,無更加有效的方法。尋找消除排斥反應(yīng)的新療法是目前移植技術(shù)的當(dāng)務(wù)之急。本研究采用低毒性的慢病毒進(jìn)行C57BL小鼠survivin基因RNA干擾(RNA interference,RNAi)載體的構(gòu)建,并在體外觀察慢病毒RNAi載體對C57BL小鼠骨髓來源的未成熟樹突狀細(xì)胞(immature dendritic cell,iDC)的轉(zhuǎn)染效率及其對iDC存活率的
2、相關(guān)影響的研究,為后期研究survivin基因在iDC轉(zhuǎn)分化機制中的作用奠定基礎(chǔ)。
方法:針對已經(jīng)篩選確定的survivin基因RNA干擾有效靶序列,合成相關(guān)靶序列的雙鏈DNA片段,接入pLVTHM載體,慢病毒元件共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,包裝生產(chǎn)出慢病毒,并對體外培養(yǎng)的iDC進(jìn)行轉(zhuǎn)染,運用熒光顯微鏡檢測感染效率和流式細(xì)胞術(shù)觀察轉(zhuǎn)染后iDC的凋亡率。
結(jié)果:通過PCR和測序的方法確定陽性克隆,并進(jìn)行慢病毒包裝和滴度
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