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1、胰島移植手術(shù)操作簡(jiǎn)單,可減少外源胰島素使用,降低并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn),有望成為糖尿病最終治療方案。近年來(lái),隨著胰島移植研究的廣泛開(kāi)展,胰島移植技術(shù)也取得了很大進(jìn)展,但是胰島數(shù)量不足以及術(shù)后免疫排斥反應(yīng)仍然是胰島移植最終進(jìn)入臨床階段的最大阻礙。本論文在探究建立高效胰島分離技術(shù)以及胰島移植治療糖尿病小鼠的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探究了移植后利用未成熟樹(shù)突細(xì)胞(immature dendritic cells,imDCs)與間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal
2、stemcells,MSCs)誘導(dǎo)胰島移植物免疫耐受的潛在機(jī)制和應(yīng)用價(jià)值。
本文的主要研究?jī)?nèi)容歸納如下:
1.建立了糖尿病小鼠模型。本研究利用鏈脲佐菌(STZ)能選擇性對(duì)胰島β細(xì)胞造成損傷的特點(diǎn),按照100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg的劑量,一次性腹腔注射小鼠,進(jìn)行造模。研究結(jié)果表明,對(duì)于小鼠而言,150mg/kg劑量造模效果最佳,200mg/kg劑量的STZ雖然也能快速導(dǎo)致小鼠血糖升高,但是此劑量
3、可能對(duì)于小鼠機(jī)體損傷較大,導(dǎo)致部分小鼠死亡,不利于模型的建立。
2.建立了分離純化大鼠胰島細(xì)胞方法。胰島移植物質(zhì)量和數(shù)量不足是影響胰島移植效果的重要原因,本研究通過(guò)改進(jìn)胰腺膠原酶灌注消化和密度梯度離心方法純化胰島,提高了胰島的產(chǎn)量和質(zhì)量,獲得了滿意的效果。
3.成功分離培養(yǎng)了未成熟樹(shù)突細(xì)胞(imDCs)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)。將培養(yǎng)的樹(shù)突細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀分析鑒定,結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠骨髓來(lái)源的樹(shù)突細(xì)胞高表達(dá)CD
4、11c(89.9%),中度表達(dá)MHC-Ⅱ(36.61%),低表達(dá)CD80(5.03%)、CD86(1.5%),符合imDC表面標(biāo)志物的特征;對(duì)培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行體外成骨和成脂誘導(dǎo)分化,結(jié)果表明貼壁法培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞同樣具有多項(xiàng)分化潛能.
4.將imDCs與MSCs應(yīng)用于胰島移植治療糖尿病小鼠中,結(jié)果發(fā)現(xiàn)胰島與未成熟樹(shù)突細(xì)胞混合移植雖未顯著延長(zhǎng)移植物的存活時(shí)間(12±2.31 d),但能顯著降低其血糖水平;胰島與間充質(zhì)干細(xì)
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