臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療1型糖尿病的研究.pdf

1、目的：
　　研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs）對(duì)1型糖尿病(type I diabetes mellitus,T1DM)的治療作用，并探討其通過旁分泌促進(jìn)內(nèi)源性β細(xì)胞增殖的作用機(jī)制。
　　方法：
　　無菌條件下收集健康足月剖宮產(chǎn)新生兒臍帶，采用組織塊貼壁培養(yǎng)法獲取HUC-MSCs，培養(yǎng)。選取 SD雄性大鼠30例（250-30

2、0g），經(jīng)腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin,STZ）60mg/kg制備大鼠糖尿病模型。3×106HUC-MSCs尾靜脈移植入糖尿病大鼠體內(nèi)，實(shí)驗(yàn)分為三組即正常組，糖尿病大鼠未移植組,移植HUC-MSCs糖尿病組，動(dòng)態(tài)觀察6周大鼠血糖及體重變化；通過酶聯(lián)免疫法吸附法（ELISA）檢測(cè)三組血清胰島素（Ins）、C肽(C-P)表達(dá)水平；HE染色觀察三組大鼠胰島的形態(tài)變化；RT-PCR檢測(cè)與β細(xì)胞增殖相關(guān)的HUC-MSCs旁分泌

3、因子HGF、IGF1，PDGF在STZ糖尿病大鼠胰腺的表達(dá)，并檢測(cè)人胰島素基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.從臍帶中分離出的間充質(zhì)細(xì)胞呈形態(tài)均一的長梭形、類似成纖維細(xì)胞，排列緊密，呈規(guī)則漩渦貼壁生長。細(xì)胞傳代后有很強(qiáng)的增殖能力，形態(tài)穩(wěn)定。
　　2.經(jīng)尾靜脈將HUC-MSCs移植入糖尿病大鼠體內(nèi)后，移植細(xì)胞組大鼠血糖維持穩(wěn)定水平，并有下降趨勢(shì)，未移植組糖尿病大鼠血糖持續(xù)升高，兩組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；未移植組

4、糖尿病大鼠較移植HUC-MSCs糖尿病大鼠體重明顯減輕，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；正常組大鼠血糖、體重與未移植細(xì)胞組、移植HUC-MSCs組兩兩比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（P<0.05）
　　3.移植6周后用酶聯(lián)免疫法吸附法測(cè)定大鼠血清胰島素、C肽，結(jié)果顯示移植HUC-MSCs糖尿病大鼠組Ins、C-P分泌量較未移植組均增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.移植6周后取各組胰腺石蠟包埋，HE染色結(jié)果顯示經(jīng)HUC-MSCs移植

5、后治療6周糖尿病大鼠胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)目增加，排列較規(guī)則
　　5.RT-PCR檢測(cè)經(jīng)移植HUC-MSCs糖尿病大鼠無人胰島素基因表達(dá)。RT-PCR檢測(cè)經(jīng)移植HUC-MSCs糖尿病大鼠有PDGF、IGF1、HGF表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.HUC-MSCs未經(jīng)誘導(dǎo)后移植體內(nèi)可改善糖尿病血糖水平，促進(jìn)胰島素、C肽水平增加，具有明顯治療效果，是一條安全，有效的治療1型糖尿病的新途徑。
　　2.HUC-MSCs通過旁分泌作用P