全人源抗CCR7噬菌體單鏈抗體的篩選及初步鑒定.pdf

1、目的：從噬菌體抗體庫中篩選抗CCR7單鏈融合抗體，并對其性能進(jìn)行初步檢測。
　　 方法：PCR檢測大腸桿菌中ScFv基因插入率；1％瓊脂糖凝膠電泳鑒定SfiⅠ和NotⅠ雙酶切質(zhì)粒的結(jié)果；分別以乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435s細(xì)胞及CCR-7多肽片段為靶抗原對抗體庫進(jìn)行4輪和3輪篩選富集。將陽性克隆轉(zhuǎn)化E.coli HB2151進(jìn)行可溶表達(dá)?？贵w親和層析純化后，Western-blot結(jié)果顯示獲得抗體相對分子質(zhì)量為34 kd左右。

2、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫組織化學(xué)檢測與放射免疫顯像均證實(shí)單鏈抗體與表達(dá)CCR7的乳腺癌細(xì)胞特異性結(jié)合。人工基底膜穿透實(shí)驗(yàn)檢測131Ⅰ標(biāo)記scFv抗體對CCR7抗原表達(dá)陽性乳腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。
　　 結(jié)果：ScFv基因插入率為90％（18/20），雙酶切鑒定檢測到目的條帶。經(jīng)4輪細(xì)胞篩選，3輪抗原篩選抗CCR7抗原的噬菌體抗體得到了明顯富集，在E.coli HB2151中實(shí)現(xiàn)可溶表達(dá)。Western-blot結(jié)果顯示獲得抗體相對分