缺氧在成釉細胞瘤轉(zhuǎn)歸中的作用及機理研究.pdf

1、目的:
　　 成釉細胞瘤(ameloblastoma,AM)是口腔頜面部最常見的良性牙源性腫瘤,具有較強的局部侵襲性,術(shù)后容易復(fù)發(fā)。缺氧是腫瘤微環(huán)境的普遍特征之一。在局部缺氧微環(huán)境中,腫瘤細胞為了維持自身能量代謝,實現(xiàn)向周圍組織侵襲、轉(zhuǎn)移,發(fā)生一系列適應(yīng)性反應(yīng),包括增加新生血管的形成、分泌基質(zhì)金屬蛋白酶降解細胞外基質(zhì),等等。研究證實,缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia-induciblefactor-1,HIF-1)是一種廣泛存在

2、于多種腫瘤細胞中的缺氧應(yīng)答調(diào)控因子,通過調(diào)節(jié)多種靶基因的表達,參與腫瘤細胞的缺氧適應(yīng)反應(yīng),與腫瘤細胞的增殖、凋亡及侵襲、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。HIF-1是一種異源二聚體轉(zhuǎn)錄因子,由α亞基和β亞基組成,其中α亞基是唯一的氧調(diào)節(jié)亞單位,決定HIF-1的活性。本課題研究關(guān)注HIF-1α、Id-1、VEGF、MMP-2/MMP-9在成釉細胞瘤組織中的表達情況,初步探討缺氧與成釉細胞瘤之間的關(guān)系,為該腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲機理的研究提供科學(xué)依據(jù)。

3、>　　 方法:
　　 1.搜集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院口腔頜面外科2008～2011年接受一期開窗術(shù)、二期切除術(shù)治療的壁式/單囊型成釉細胞瘤患者兩次手術(shù)切取組織的病理切片,采用免疫組織化學(xué)SP法檢測HIF-1α、Id-1、VEGF、MMP-2/MMP-9的表達情況。
　　 2.取山東大學(xué)齊魯醫(yī)院口腔頜面外科2011～2012年接受手術(shù)治療的實性成釉細胞瘤患者術(shù)中切除的腫瘤組織及瘤周正常牙齦組織,4％中性多聚甲醛固定24h以上,

4、送病理科包埋處理連續(xù)切片;同時搜集病理結(jié)果為實性成釉細胞瘤的患者的組織切片,采用免疫組織化學(xué)SP法檢測HIF-1α、Id-1、VEGF、MMP-2/MMP-9的表達情況。
　　 3.取山東大學(xué)齊魯醫(yī)院口腔頜面外科2011～2012年接受手術(shù)治療的實性成釉細胞瘤患者術(shù)中切除的腫瘤組織及瘤周正常牙齦組織,隨即提取組織蛋白及RNA,分別采用WesternBlot、FQ-PCR檢測HIF-1α的表達情況。
　　 結(jié)果:
　

5、　 1.采用一期開窗術(shù)、二期切除術(shù)治療的壁式成釉細胞瘤患者,開窗時切取腫瘤組織中HIF-1α蛋白高表達,陽性細胞數(shù)＞50％;切除術(shù)中切取的組織中未檢測到HIF-1α的表達。Id-1、VEGF、MMP-2/MMP-9在兩次手術(shù)標(biāo)本中的表達情況與HIF-1α的表達一致。
　　 2.實性成釉細胞瘤患者組織切片中,腫瘤組HIF-1α的陽性率為68.75％(11/16),對照組(瘤體周圍正常牙齦組織)HIF-1α的陽性率為16.67％(

6、1/6),;兩者差異顯著(P＜0.05)。腫瘤組中陽性細胞數(shù)在13％～83％范圍,平均39.33％。HIF-1α陽性表達的腫瘤組織中,Id-1、VEGF、MMP-2/MMP-9均呈陽性,且與對照組有顯著差別。
　　 3.實性成釉細胞瘤手術(shù)患者腫瘤組織及瘤體周圍正常牙齦組織中均檢測到HIF-1αmRNA的表達。以瘤體周圍正常牙齦組織中HIF-1αmRNA的表達水平為參照,瘤體組織中HIF-1αmRNA相對表達量在1.04～1.14

7、范圍,平均1.08±0.04。
　　 4.WesternBlot檢測出HIF-1α蛋白在實性成釉細胞瘤瘤體組織中高表達,瘤體周圍正常牙齦組織中幾乎未見表達。
　　 結(jié)論:
　　 成釉細胞瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲受局部缺氧微環(huán)境的影響。在缺氧微環(huán)境中,HIF-1α表達增高,并通過上調(diào)Id-1蛋白、VEGF、MMP-2/MMP-9的表達,增加腫瘤新生血管形成,使腫瘤細胞適應(yīng)缺氧,同時,提高血管的通透性、促進腫瘤細胞降解細