戊二醛-辛醇、環(huán)氧化合物及染料介導(dǎo)光氧化處理的牛頸靜脈的毒理學(xué)評價.pdf

1、目的：本實驗通過體內(nèi)微核、染色體畸變實驗與體外鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變實驗(AMES實驗)評價戊二醛／辛醇、環(huán)氧化合物、染料介導(dǎo)光氧化處理的牛頸靜脈對機(jī)體的遺傳毒性作用；通過熱原實驗與全身毒性實驗評價以上三種方法處理的牛頸靜脈對機(jī)體的一般毒性作用。 方法：將戊二醛／辛醇、環(huán)氧化合物、染料介導(dǎo)光氧化處理的牛頸靜脈按照標(biāo)準(zhǔn)制作浸提液。 一．遺傳毒性實驗：(1)．微核實驗：將三種浸提液及陰性、陽性對照物注入小鼠腹腔。每隔24小時

2、重復(fù)注射一次，共4次。末次注射后24小時取股骨骨髓細(xì)胞制作涂片，Giemsa染色，光鏡下計數(shù)1000個嗜多染紅細(xì)胞，觀察含有微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，以微核率表示。用SPSSl2.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行X<'2>檢驗分析。(2)．染色體畸變實驗：供試液注射與微核實驗相同。第4次注射后20小時腹腔注射秋水仙素，4小時后取股骨骨髓經(jīng)低滲、固定處理，細(xì)胞懸液制作涂片，Giemsa染色。光鏡下觀察100個分散良好的中期分裂相細(xì)胞，記錄染色體結(jié)構(gòu)異常和數(shù)

3、目異常的細(xì)胞，計算其畸變細(xì)胞率。統(tǒng)計方法同前。(3).AMES實驗：在頂層培養(yǎng)基中依次加入測試菌株新鮮增菌液，混勻后分別加入浸提液、生理鹽水或陽性對照物，加與不加S-9活化系統(tǒng)各半，傾倒在底層培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)48小時。計數(shù)每皿上長出回變菌落數(shù)。 二．全身毒性實驗：(1)．熱原實驗：新西蘭大白兔測其平均正常體溫后，耳緣靜脈注入浸提液，每隔1小時測量其體溫1次，共6次，取該兔體溫的最大升高溫度(℃)，并計算3只家兔最大體溫升高總

4、和。(2)．全身毒性實驗：(a)．急性毒性實驗：實驗小鼠由尾靜脈注入供試液，觀察注射后4，24，48和72h的毒性反應(yīng)程度分級；(b)．亞急性毒性實驗：注射方法同急性毒性實驗，隔日重復(fù)注射一次，第28日取血作血常規(guī)及生化檢查，用SPSS12.0軟件包對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行X<'2>檢驗分析；(c)．慢性毒性實驗：注射方法同急性毒性實驗，第60日取血作血常規(guī)及生化檢查，統(tǒng)計方法同前。 結(jié)果：一．遺傳毒性實驗：(1)．微核實驗：陰性對照組雄

5、性、雌性小鼠的股骨骨髓細(xì)胞微核率分別為1‰與1.2‰，辛醇組為2.2‰與1‰，PC組為1．2.‰與1.8‰，光氧化組為1.8‰與1.6‰，各組之間x<'2>檢驗分析無顯著差異性(p>0.05)；試驗組微核率與陽性對照環(huán)磷酰胺組(分別為29‰和37.6‰)有顯著差異性(p<0.05)；(2)．染色體畸變實驗：陰性對照組雄性、雌性小鼠的股骨骨髓細(xì)胞染色體畸變率分別為1％與1.6％，辛醇組為1.8％與1.6％，PC組為2.0％與1.8％經(jīng)，光

6、氧化組為2.2％與1.8％，各組之間x<'2>檢驗分析無顯著差異性(p>O.05)；試驗組微核率與陽性對照環(huán)磷酰胺組(分別為20.6％和25.2％)有顯著差異性(p<0.05)；(3)．AMES實驗：陽性對照組的菌落數(shù)超過陰性對照組菌落數(shù)的2倍，而各實驗組的菌落數(shù)均未超過陰性對照組菌落數(shù)的2倍，實驗結(jié)果為陰性。 二．全身毒性實驗：(1)．熱原實驗：各實驗組體溫升高均在0.6℃以下，上升體溫總和在1.4℃以下；(2)．全身毒性實驗

7、：急性毒性實驗毒性反應(yīng)程度均為正常，小鼠體重?zé)o明顯下降，均無中毒反應(yīng)和死亡；亞急性毒性試驗及慢性毒性實驗各實驗組血常規(guī)及生化指標(biāo)與陰性對照組經(jīng)x<'2>檢驗分析，P>0.05無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：l辛醇、環(huán)氧化合物、光氧化處理的牛頸靜脈無明顯致染色體損傷作用； 2辛醇、環(huán)氧化合物、光氧化處理的牛頸靜脈無明顯致基因突變作用； 3辛醇、環(huán)氧化合物、光氧化處理的牛頸靜脈對被植入體無明顯毒性作用； 4辛醇、環(huán)氧化