強(qiáng)的松對(duì)IFN-γ體外誘導(dǎo)腎病綜合征患兒PBMC HLA的調(diào)控及其機(jī)制研究.pdf

1、本文研究目的：通過(guò)研究強(qiáng)的松對(duì)IFN-γ體外誘導(dǎo)INS患兒、正常人PBMC HLA表達(dá)的影響及對(duì)正常人PBMC C ⅡTA轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)，旨在從分子水平和基因水平探討糖皮質(zhì)激素對(duì)HLA的調(diào)控作用及其調(diào)控機(jī)制，為其臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法： 1.INS患兒PBMC經(jīng)過(guò)IFN-γ聯(lián)合PHA刺激誘導(dǎo)活化，用不同濃度強(qiáng)的松干預(yù)，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其PBMC組成性、活化后和強(qiáng)的松處理前后HLA-DR7、Ⅰ類/Ⅱ類分子的表達(dá)量并

2、與正常對(duì)照組進(jìn)行分析比較。 2.用強(qiáng)的松干預(yù)經(jīng)IFN-γ聯(lián)合PHA刺激誘導(dǎo)活化的正常人PBMC，采用RT-PCR的方法擴(kuò)增其CⅡTA mRNA，并對(duì)處理后PBMC CⅡTA轉(zhuǎn)錄水平與未活化的組成性及活化后的誘導(dǎo)性CⅡTA轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行分析比較。 研究結(jié)果： 1.強(qiáng)的松對(duì)INS患兒PBMC HLA表達(dá)影響的結(jié)果。 (1)體外培養(yǎng)INS患兒及正常人PBMC均組成性表達(dá)HLA(平均熒光強(qiáng)度HLA-Ⅰ：113.33

3、±2.08、68.53±3.39：HLA-Ⅱ：26.87±0.78、2.28±0.12；HLA-DR7：7.77±0.55、6.97±0.74，P值均<0.01)，但I(xiàn)NS患兒高于正常人(尤以HLA-Ⅱ類分子突出，為正常人的11.78倍)。 (2)經(jīng)IFN-γ聯(lián)合PHA活化后HLA-Ⅰ/Ⅱ類分子和DR7分子表達(dá)增加(平均熒光強(qiáng)度HLA Ⅰ：187.33±0.58、158.00±17.35；HLA Ⅱ：41.10±0.46、5.2

4、7±0.38；HLA-DR7：13.33±1.53、10.87±1.41，P值均<0.01)。 (3)經(jīng)不同濃度強(qiáng)的松(10<'-4>M、10<'-6>M、10<'-8>M)處理后，HLA-Ⅰ/Ⅱ>類分子和DR7分子比活化后表達(dá)減少(平均熒光強(qiáng)度分別為HLA-Ⅰ：157.33±8.62、138.67±15.53和159.67±2.51、142.00±3.46及169.33±4.72、147.00±5.29；HLA-Ⅱ類為35.4

5、3±3.72、3.48±0.19和36.40±5.40、3.33±0.21及36.47±0.67、3.22±0.24；HLA-DR7為9.45±0.38、6.43±0.76和9.28±0.34、6.59±0.77及9.51±0.41、6.40±0.43；P值均<0.01)。 (4)經(jīng)不同濃度強(qiáng)的松(10<'-4>M、10<'-6>M、10<'-8>M)預(yù)處理后，與活化組比較HLA-Ⅰ/Ⅱ類分子和HLA-DR7表達(dá)減少(平均熒光強(qiáng)

6、度分別是122.00±3.60、114.33±8.73和125.67±2.31、121.33±8.02及127.33±4.93、123.67±5.77；HLA-Ⅱ類為21.17±0.40、3.57±0.28和23.13±1.53、3.75±0.26及26.10±0.40、3.85±0.17；HLA-DR7為7.76±0.22、7.65±1.16和8.39±0.54、7.53±0.24及8.01±0.74、7.70±0.50，P值均<0.

7、01)，強(qiáng)的松對(duì)INS患兒的抑制率要高于正常人，并且HLA-Ⅱ類分子表達(dá)的抑制作用表現(xiàn)出劑量依賴性(P<0.01)，隨著強(qiáng)的松濃度的增高，抑制效應(yīng)增強(qiáng)。 2.強(qiáng)的松對(duì)PBMC CⅡTA轉(zhuǎn)錄影響的結(jié)果：體外培養(yǎng)的正常人PBMC組成性表達(dá)CⅡTA，經(jīng)IFN-γ聯(lián)合PHA活化后表達(dá)增加，強(qiáng)的松干預(yù)后，表達(dá)量明顯減少。 研究結(jié)論： 1.INS患兒PBMC在未活化狀態(tài)下即有大量HLA-Ⅰ/Ⅱ類分子和一定水平的HLA-DR7