端粒酶與膀胱腫瘤關(guān)系的基礎(chǔ)及臨床研究.pdf

1、同濟醫(yī)科大學博士學位論文端粒酶與膀胱腫瘤關(guān)系的基礎(chǔ)及臨床研究姓名：高興成申請學位級別：博士專業(yè)：泌尿外科指導教師：章詠裳2000.5.1胱腫瘤。4)、Ni寸AN胱腫瘤T24細胞系誘導分化時端粒酶活性的變化及其與細胞周期動力學改變的關(guān)系。，K方法國1)、在TRAP法的基礎(chǔ)之上，建立尿脫落細胞端粒酶活性PCR—ELISA檢測法，并應(yīng)用PCR—ELISA法檢測7例正常人、26例非膀胱腫瘤(17例前列腺增生、9例泌尿系感染)患者、53例膀胱腫瘤

2、患者尿液脫落細胞端粒酶活性，并將兩者檢測的陽性率結(jié)果與病理檢查結(jié)果進行比較。2)、同時JH端粒酶活性PCR—ELISA檢測法和尿細胞學法對膀胱腫瘤患者尿脫落細胞進行檢測，比較兩者的差異。3)、設(shè)計并合成兩條針對端粒酶RNA模板區(qū)的asONs片段，用PCRELlSA法檢測其對培養(yǎng)的T24細胞系端粒酶活性的影響：用MTT法檢測其對T24細胞系增殖活性的影響。4)、用全反式維甲酸(ATRA)誘導分化人膀胱腫瘤T24細胞系細胞，用PCRELIS

3、A方法檢測T24細胞系分化后端粒酶活性的變化，用流式細胞術(shù)檢測細胞周期動力學改變。K結(jié)果目1)、正常人尿液端粒酶活性均呈陰性，非膀胱腫瘤患者尿液脫落細胞端粒酶活性陽性率為769％(2／26)，膀胱腫瘤患者尿液脫落細胞端粒酶活性陽性率為6415％(34／53)，各組之間差異有極顯著性(P0001)、但端粒酶活性與腫瘤的分期分級無相關(guān)性。2)、PCRELISA法檢測膀胱腫瘤患者尿脫落細胞端粒酶活性的總陽性率642％，明顯高于尿細胞學檢查總陽

4、性率396％，兩者比較有極顯著性(Po001)。在低級膀胱腫瘤中(G1、)中，端粒酶活性的陽性率為556％，尿細胞學檢查的陽性率為154％，差異具有極顯著性(PO001)。3)、與端粒酶RNA模板區(qū)完全互補的asON；t片段能夠抑制培養(yǎng)的T24細胞株的端粒酶活性并且能夠抑制T24細胞株的增殖活性。經(jīng)不同濃度(OuM、5pM、lOuM)asONl處理后T24細胞系端粒酶活性受到抑制，吸光度A值分別為O780100D、0240140D、01

5、30110D；經(jīng)lOuMasONl處理1、3、5、7天，T24細胞的增殖活性逐漸下降，A值分別為0590110D、0390090D、02l0020D、0190070D，各組之間經(jīng)檢驗差異有極顯著性(pO001)。4)、T24細胞系細胞經(jīng)ATRA誘導分化后，細胞周期動力學發(fā)生改變：S期細胞所占比例逐漸降低，G0／G1期細胞所占比例逐漸增加：端粒酶活性被明顯抑制，與對照組比較，ATRA處理后l、3、5、7天端粒酶活性抑制率分別為109％、3