絨山羊端粒酶組分基因的序列克隆及其表達與端粒酶活性的相關(guān)性研究.pdf

1、真核生物體內(nèi)的端粒酶(Telomerase)是一種逆轉(zhuǎn)錄酶，能夠特異地延長端粒DNA長度，從而調(diào)節(jié)細胞的分裂與增殖，端粒酶主要包括RNA組分(Telomerase RNA Component，TERC)和逆轉(zhuǎn)錄酶組分(Telomerase ReverseTranscriptase，TERT)。本實驗對絨山羊端粒酶的這兩種組分的基因序列進行了克隆和測序，并對這兩種組分在成年絨山羊不同組織中的表達情況及端粒酶活性狀態(tài)進行研究。首先，分別分析

2、和比對了牛、人、小鼠和大鼠中TERC和TERT的序列，根據(jù)序列同源性設計相應引物，并利用絨山羊基因組DNA和cDNA作為模板，通過PCR擴增得到TERC組分474bp的基因序列與289bp的cDNA序列，以及TERT基因4842bp的基因序列和2712bp的cDNA部分序列，將擴增產(chǎn)物連接到pGEM-T easy載體中進行測序，將所得的序列信息利用NCBI網(wǎng)站的BLAST軟件進行比對，結(jié)果表明，絨山羊相應組分的序列與牛的序列同源性高達9

3、4％以上，并且與人、小鼠、大鼠的序列相比序歹0的同源性同樣很高。 在此基礎(chǔ)上，利用RT-PCR技術(shù)對絨山羊端粒酶這兩種組分在心臟、腎臟、肝臟、睪丸組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平進行檢測。結(jié)果顯示：TERC基因在以上四種組織中均有表達，而TERT基因則僅在腎臟和睪丸中有表達，且睪丸中的轉(zhuǎn)錄水平明顯高于腎臟，而在心臟和肝臟中未檢測到。同時，通過端粒重復序列擴增法(Telomeric Repeat Amplification Protoco