妊娠晚期母鼠脫水對(duì)胎兒及子代RAS的影響.pdf

1、研究背景：妊娠期多種原因如過度活動(dòng)、發(fā)熱、出血、嘔吐及腹瀉等均可造成孕婦機(jī)體脫水。脫水影響機(jī)體體液中水和電解質(zhì)平衡，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)外失水。腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是調(diào)控體液平衡的重要內(nèi)分泌系統(tǒng)，在調(diào)節(jié)機(jī)體心血管活動(dòng)、神經(jīng)內(nèi)分泌、飲水飲鹽行為等方面均起著重要作用。大量研究表明機(jī)體脫水可導(dǎo)致體液失衡及影響RAS，但有關(guān)妊娠期脫水對(duì)胎兒RAS及心臟、腎臟發(fā)育的影響尚不清楚。 Barker理論是目前國(guó)際上有關(guān)胎源性疾病的研究熱點(diǎn)，大量

2、流行病學(xué)及實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明：宮內(nèi)應(yīng)激所導(dǎo)致“印跡”效應(yīng)可“程序化”影響成年后心血管疾病(如高血壓等)的發(fā)生，并發(fā)現(xiàn)RAS在高血壓發(fā)病過程中起重要作用。然而，妊娠期母鼠脫水是否對(duì)成年子代的RAS產(chǎn)生印跡效應(yīng)，是否影響子代RAS對(duì)體液平衡及心血管功能的調(diào)控，目前國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)研究妊娠晚期母鼠脫水對(duì)胎鼠RAS和心臟、腎臟發(fā)育的影響，并研究脫水對(duì)成年子代大鼠RAS的印跡效應(yīng)及其功能的影響。 第一部分妊娠晚期母鼠脫水對(duì)胎兒及其

3、RAS發(fā)育的影響 目的：妊娠晚期母鼠脫水對(duì)胎兒的調(diào)控因素RAS及心臟、腎臟發(fā)育的影響。 方法：妊娠晚期母鼠脫水三天后，稱量胎鼠體重、心重、腎重及其干重；血?dú)夥治鰞x檢測(cè)母、胎鼠的血?dú)庵笜?biāo)和電解質(zhì)，用滲透壓儀檢測(cè)血漿滲透壓；用放射免疫法檢測(cè)母、胎鼠血液中血管緊張素(Ang) I、Ang II、血管加壓素(VP)和醛固酮(ALD)的濃度；用透射電鏡方法檢測(cè)胎鼠心、腎臟組織超微結(jié)構(gòu)，并用激光多譜勒檢測(cè)腎臟表面血流；用wester

4、n blot和熒光定量PCR的方法檢測(cè)胎鼠心臟、腎臟中血管緊張素受體(ATR)的蛋白和mRaNA水平，并檢測(cè)胎鼠肝臟中血管緊張素原(ATG)的mRNA水平。 結(jié)果：妊娠晚期母鼠脫水可使胎鼠體重、心臟和腎臟的重量明顯降低，胎鼠血鈉、紅細(xì)胞壓積及血漿滲透壓增加，胎鼠血液中AngI、Ang II、VP和ALD的濃度明顯增加，及肝臟中ATG的mRNA水平顯著增加。妊娠晚期脫水可導(dǎo)致胎鼠心臟及腎臟超微結(jié)構(gòu)的改變，明顯增加胎鼠心臟中AT2R

5、的mRNA和蛋白水平，但不影響AT1aR及AT1bR的mRNA和AT1R的蛋白水平；可明顯增加胎鼠腎臟中AT1R與AT2R的mRNA和蛋白水平，并減少腎血流量。 結(jié)論：妊娠晚期脫水可明顯改變胎鼠體內(nèi)的RAS水平，并影響胎鼠心臟和腎臟的發(fā)育。 第二部分妊娠晚期母鼠脫水對(duì)成年子代RAS的“印跡”效應(yīng)及其功能的影響 目的：研究妊娠晚期母鼠脫水對(duì)成年子代大鼠體內(nèi)RAS水平的影響及其“印跡”效應(yīng)，并研究妊娠晚期母鼠脫水對(duì)成

6、年子代大鼠RAS調(diào)控體液平衡及心血管系統(tǒng)功能的影響。 方法：用妊娠晚期母鼠脫水組及對(duì)照組成年子代，檢測(cè)子代大鼠體重、心臟和腎臟重量。在基礎(chǔ)狀態(tài)下，用血?dú)夥治鰞x檢測(cè)成年子代大鼠血?dú)庵笜?biāo)和電解質(zhì)，用滲透壓儀檢測(cè)血漿滲透壓；用放射免疫法檢測(cè)血液中AngI、Ang II、VP和ALD的濃度；檢測(cè)成年子代大鼠心血管系統(tǒng)對(duì)PD123319、Losartan及AngII的應(yīng)答；檢測(cè)離體胸主動(dòng)脈及腸系膜動(dòng)脈對(duì)血管舒縮物質(zhì)的反應(yīng)；用western

7、 blot和熒光定量PCR的方法檢測(cè)心臟及腎臟中AT1R和AT2R的蛋白和mRNA水平，并檢測(cè)肝臟中ATG的mRNA水平。在脫水應(yīng)激下，檢測(cè)成年子代大鼠體內(nèi)RAS組分的濃度，并檢測(cè)脫水對(duì)成年子代大鼠體液平衡、心血管系統(tǒng)及飲水飲鹽行為的影響。 結(jié)果：妊娠晚期母鼠脫水組雌、雄性成年子代大鼠的體重、心臟及腎臟的重量、血?dú)庵笜?biāo)及電解質(zhì)、血液中AngI、Ang II、VP和ALD的濃度與對(duì)照組比較無(wú)差異，但脫水組成年子代大鼠肝臟中ATG

8、mRNA水平及心臟、腎臟中AT1R與AT2R的mRNA和蛋白水平均明顯不同于對(duì)照組。與對(duì)照組比較，脫水組雄性成年子代大鼠對(duì)AngII、Losartan及PD123319的反應(yīng)均明顯增強(qiáng)，而雌性子代無(wú)差異性，但雌、雄性成年子代大鼠的壓力反射敏感性均明顯降低。脫水組成年子代大鼠的胸主動(dòng)脈及腸系膜動(dòng)脈對(duì)AngII的收縮血管反應(yīng)均明顯增強(qiáng)。成年期脫水48h后，脫水組的雌、雄性成年子代鼠血?dú)庵笜?biāo)及電解質(zhì)與對(duì)照組比較無(wú)差異性，但血漿中Ang II、

9、VP和ALD的濃度明顯高于對(duì)照組，飲鹽量和血壓也明顯升高。 結(jié)論：妊娠晚期母鼠脫水對(duì)成年子代大鼠的RAS有“印跡”效應(yīng)。脫水組雌、雄性成年子代大鼠對(duì)心血管系統(tǒng)的調(diào)控存在性別差異，壓力反射敏感性降低可能是子代心血管系統(tǒng)應(yīng)答“程序化”效應(yīng)的共同機(jī)制。脫水組成年子代大鼠的血管對(duì)Ang II升高血壓的敏感性增強(qiáng)，提示其發(fā)生高血壓等心血管疾病的危險(xiǎn)性明顯升高。脫水組成年子代大鼠在脫水刺激時(shí)，AngII、ALD及VP濃度升高更明顯，這與飲鹽

10、量及血壓的顯著增加可能相關(guān)，表現(xiàn)為患高血壓等心血管疾病的“易感性”提高。 第三部分妊娠晚期母鼠脫水對(duì)雄性成年子代大鼠心臟和腎臟蛋白質(zhì)組影響的初探 目的：妊娠晚期母鼠脫水對(duì)雄性成年子代大鼠心臟和腎臟蛋白質(zhì)組表達(dá)影響。 方法：采用雙向電泳技術(shù)檢測(cè)對(duì)照組及脫水組雄性成年子代大鼠心臟和腎臟中蛋白質(zhì)組表達(dá)的差異。 結(jié)果：雄性成年子代大鼠心臟和腎臟組織中蛋白質(zhì)分布模式在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組之間基本一致。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組心臟中