羅紅霉素對(duì)哮喘小鼠肺組織cyclinD1表達(dá)及ASMC增殖的影響.pdf

1、目的:觀察cyclinD1在哮喘小鼠肺組織中表達(dá)變化及其對(duì)ASMC增殖的影響；探討羅紅霉素對(duì)cyclinD1表達(dá)及ASMC增殖的干預(yù)作用。
　　 方法:將30只雌性清潔級(jí)BALA/c小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（A組）、哮喘組（B組）、羅紅霉素干預(yù)組（C組），每組10只。A 組給予含1mgAl(OH)3 生理鹽水致敏及生理鹽水霧化激發(fā)。B、C、組小鼠于第0、7、14 d給予生理鹽水[雞卵白蛋白（OVA）25 μg﹢Al(OH)3 1 mg

2、] 0.2 ml腹腔注射致敏，第21~26 天給予2％的OVA生理鹽水霧化激發(fā)，每天一次，每次30分鐘，為哮喘急性期；第28~50 天隔天1次2％的OVA生理鹽水霧化激發(fā)，為哮喘慢性期。在每次激發(fā)前1 h，C 組給予羅紅霉素懸濁液（200μg/ml）5 mg/kg灌胃，A、B組生理鹽水0.5ml灌胃對(duì)照。末次激發(fā)后24小時(shí)處死小鼠，收集各組小鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）行白細(xì)胞（WBC）總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）計(jì)數(shù)。右肺用逆轉(zhuǎn)錄聚

3、合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法測(cè)定小鼠肺組織cyclinD1mRNA基因的表達(dá)。取左肺組織做石蠟切片，行HE染色、細(xì)胞周期蛋白(cyclinD1)免疫組化染色，圖像分析軟件測(cè)定管腔基底膜周長(zhǎng)（Pbm）、氣管壁總面積（Wat）、氣道平滑肌面積（Wam）、ASMC核數(shù)（N），結(jié)果以Pbm標(biāo)化，分別代表支氣管壁厚度（Wat/Pbm）、氣道平滑肌層厚度（Wam/Pbm）、ASMC核數(shù)（N/Pbm），并測(cè)定cyclinD1的灰度值。
　　

4、結(jié)果:
　　 （1）BALF中WBC總數(shù)、EOS百分比B組分別為（30.08±2.06）、（10.70±0.93）％ ，較A組（12.36±1.91）、（1.30±0.54）％明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C組分別為（21.10±2.76）、（5.34±4.08）％，較 B組明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 （2）cyclinD1蛋白表達(dá)的灰度值、mRNA的A值B組分別為（63.14±4.70）、（0.95±0.05），

5、較A組（34.25±5.63）、（0.49±0.07）明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C組分別為（51.87±4.75）、（0.58±0.06），較B組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 （3）Wat/Pbm、 Wam/Pbm、 N/PbmB組分別為（14.10±1.48）μm2/μm、（5.67±0.75）μm2/μm、（7.97±0.91）個(gè)/mm，較A組（4.78±0.89）μm2/μm、（1.47±0.47）μm2/μm、（

6、3.13±0.75）個(gè)/mm明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C組分別為（9.32±1.62）μm2/μm、（3.49±1.84）μm2/μm、（6.07±0.86）個(gè)/mm，較 B組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 （4）小鼠肺組織cyclinD1蛋白灰度值與Wat/Pbm 、Wam/Pbm、N/Pbm均呈線性正相關(guān)相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1. cyclinD1在哮喘小鼠肺組織中表達(dá)增加且表達(dá)的量與氣道壁厚度、