Caveolin-1在TGF-β1誘導(dǎo)哮喘ASMCs增殖中的作用及羅紅霉素的干預(yù).pdf

1、微囊蛋白-1(caveolin-1)是細(xì)胞膜上信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)中心，其將胞外信號(hào)傳遞至胞內(nèi)，進(jìn)而影響細(xì)胞活動(dòng)。近年的研究表明轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)是哮喘發(fā)病過(guò)程中的關(guān)鍵介質(zhì)，有關(guān)TGF-β1與其受體結(jié)合后刺激氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)增殖的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究已有不少，但從caveolin-1水平研究其在TGF-β1誘導(dǎo)ASMCs增殖中的作用的報(bào)道則不多。具有抗炎作用的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素羅紅霉素(RXM)在caveolin-1水

2、平影響ASMCs增殖的作用也鮮有報(bào)道。為了闡明caveolin-1在TGF-β1誘導(dǎo)ASMCs增殖中的機(jī)制，及RXM在caveolin-1水平影響ASMCs增殖的作用，我們從以下三個(gè)部分進(jìn)行闡述。
　　第一部分 TGF-β1對(duì)哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖的影響
　　目的:探討TGF-β1對(duì)哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖的影響
　　方法:
　　復(fù)制大鼠慢性哮喘模型，在體外培養(yǎng)原代大鼠氣道平滑肌細(xì)胞。采用酶聯(lián)免疫(ELIS

3、A)法檢測(cè)對(duì)照組和哮喘組氣道平滑肌細(xì)胞上清的TGF-β1濃度;將大鼠氣道平滑肌細(xì)胞隨機(jī)均勻接種到96孔板:分別以1ng/ml、10ng/ml和100ng/mlTGF-β1刺激后采用CCK-8法檢測(cè)在不同濃度TGFβ1刺激后細(xì)胞的增殖情況。
　　結(jié)果:
　　檢測(cè)兩組細(xì)胞上清發(fā)現(xiàn)，哮喘組的TGF-β1濃度明顯高于對(duì)照組(p＜0.05)。哮喘組較對(duì)照組，細(xì)胞增殖明顯(p＜0.05)，不同濃度TGF-β1刺激細(xì)胞增殖時(shí)，10ng/m

4、l和100ng/mlTGF-β1刺激后細(xì)胞增殖較1ng/mlTGF-β1刺激后增殖明顯(p＜0.05)，而10ng/ml和100ng/mlTGF-β1刺激后細(xì)胞增殖無(wú)明顯差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　與正常大鼠相比，哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞分泌TGF-β1明顯增多;TGF-β1在一定濃度范圍內(nèi)能刺激哮喘氣道平滑肌細(xì)胞增殖。
　　第二部分 Caveolin-1通過(guò)PI3K途徑在TGF-β1誘導(dǎo)哮喘大鼠ASMCs增

5、殖中的作用及羅紅霉素的干預(yù)
　　目的:探討caveolin-1通過(guò)PI3K途徑在TGF-β1誘導(dǎo)哮喘大鼠ASMCs增殖中的作用及羅紅霉素對(duì)其的干預(yù)。
　　方法:
　　1、分別用不同濃度的TGF-β1刺激大鼠氣道平滑肌細(xì)胞，各實(shí)驗(yàn)組提取標(biāo)本后，采用蛋白免疫印跡法(WB)檢測(cè)蛋白caveolin-1、Akt、p-Akt的表達(dá)情況。
　　2、將培養(yǎng)的氣道平滑肌細(xì)胞進(jìn)行分組，實(shí)驗(yàn)分為六組:①TGF-β1(10ng/ml)

6、組;②哮喘組;③正常對(duì)照組;④wortmannin+TGF-β1(10ng/ml)組;⑤β-CD(10mM)+TGF-β1(10ng/ml)組;⑥RXM(100μg/ml)+TGF-β1(10ng/ml)組。各實(shí)驗(yàn)組提取標(biāo)本后，采用蛋白免疫印跡法(WB)檢測(cè)蛋白caveolin-1、Akt、p-Akt的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1、與對(duì)照組比較，哮喘組氣道平滑肌細(xì)胞caveolin-1的表達(dá)量明顯減少(p＜0.05)，不同

7、濃度TGF-β1作用后，10ng/ml和100ng/mlTGF-β1組細(xì)胞中caveolin-1的表達(dá)量較1ng/mlTGF-β1組表達(dá)量明顯減少(p＜0.05)，而10ng/m1和100ng/mlTGF-β1兩組間無(wú)明顯差異(p＞0.05);與此同時(shí)，哮喘組氣道平滑肌細(xì)胞較對(duì)照組p-Akt的表達(dá)量明顯增加(p＜0.05)，10ng/ml和100ng/mlTGF-β1組細(xì)胞中p-Akt的表達(dá)量較1ng/mlTGF-β1組表達(dá)量明顯增加(

8、p＜0.05)，而10ng/ml和100ng/mlTGF-β1兩組間無(wú)明顯差異(p＞0.05)。
　　2、與對(duì)照組比較，哮喘組氣道平滑肌細(xì)胞caveolin-1的表達(dá)量明顯減少(p＜0.05)，TGF-β1(10ng/ml)組較哮喘組caveolin-1表達(dá)量明顯減少(p＜0.05)，RXM干預(yù)組較TGF-β1(10ng/ml)組caveolin-1表達(dá)量明顯增加(p＜0.05);與此同時(shí)，哮喘組氣道平滑肌細(xì)胞較對(duì)照組p-Akt的

9、表達(dá)量明顯增加(p＜0.05)，TGF-β1(10ng/ml)組較哮喘組p-Akt表達(dá)量明顯增加(p＜0.05)，β-CD干預(yù)組較TGF-β1(10ng/ml)組p-Akt表達(dá)量明顯增加(p＜0.05)，RXM干預(yù)組較TGF-β1(10ng/ml)組p-Akt表達(dá)量明顯減少(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　TGF-β1刺激氣道平滑肌增殖過(guò)程中能明顯抑制caveolin-1的表達(dá)，RXM可以上調(diào)caveolin-1的表達(dá)，進(jìn)

10、而抑制p-Akt的表達(dá)。
　　第三部分 Caveolin-1對(duì)哮喘大鼠ASMCs胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
　　目的:探討caveolin-1對(duì)哮喘大鼠ASMCs胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
　　方法:
　　將培養(yǎng)的氣道平滑肌細(xì)胞進(jìn)行分組，實(shí)驗(yàn)分為六組:①TGF-β1(10ng/ml)組;②哮喘組;③對(duì)照組;④wortmannin+TGF-β1(10ng/ml)組;⑤β-CD(10mM)+TGF-β1(10ng/ml)組;⑥R

11、XM(100μg/ml)+TGF-β1(10ng/ml)組。各實(shí)驗(yàn)組采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)氣道平滑肌細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子的濃度。
　　結(jié)果:
　　與對(duì)照組比較，哮喘組氣道平滑肌細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子濃度明顯增加(p＜0.05)，TGF-β1(10ng/ml)組較哮喘組胞內(nèi)鈣離子濃度明顯增加(p＜0.05)，RXM干預(yù)組較TGF-β1(10ng/ml)組胞內(nèi)鈣離子濃度明顯減少(p＜0.05)，wortmannin干預(yù)組較TGF-β1(10ng/