膿毒癥與嚴(yán)重膿毒癥患者TGF-β1的差異及膿毒癥大鼠TGF-β1干預(yù)作用的研究.pdf

1、目的:膿毒癥病情進(jìn)展迅速并且病死率高，對(duì)其針對(duì)性的治療手段目前尚缺乏，是目前急重癥醫(yī)學(xué)面臨的難題。目前已證實(shí)炎癥因子TGF-β1作為重要調(diào)節(jié)因子，參與膿毒癥的炎癥反應(yīng)，但其作用效應(yīng)存在爭議，作用機(jī)制仍未完全研究清楚。本實(shí)驗(yàn)通過比較不同嚴(yán)重程度的膿毒癥患者外周血TGF-β1含量差異，并用盲腸結(jié)扎穿孔法復(fù)制大鼠膿毒癥模型，動(dòng)態(tài)觀察不同濃度TGF-β1對(duì)膿毒癥大鼠外周血TNF-α及IL-10水平的調(diào)節(jié)作用，探討TGF-β1在膿毒癥炎癥反應(yīng)中的

2、作用及機(jī)制。
　　方法:臨床調(diào)查:依據(jù)膿毒癥及嚴(yán)重膿毒癥診斷標(biāo)準(zhǔn)，將我院急診科2014.6-2014.12收治的16例膿毒癥患者分為膿毒癥組及嚴(yán)重膿毒癥組，采集診斷明確后住院第1、2、3、5、7、14天清晨血清樣本，用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定TGF-β1血清濃度。動(dòng)物實(shí)驗(yàn):清潔級(jí)健康雄性SD大鼠100只，體重220-250克，隨機(jī)分為對(duì)照組4只、膿毒癥模型組16只、TGF-β1干預(yù)組80只，按不同給藥濃度將TGF-β1干預(yù)組分為

3、5ng/(ml·250g)組、10ng/(ml·250g)組、20ng/(ml·250g)組、50/(ml·250g)ng組、100ng/(ml·250g)組，每組16只，膿毒癥模型組及TGF-β1干預(yù)組第6小時(shí)、第12小時(shí)、第24小時(shí)、第48小時(shí)分別隨機(jī)選取4只大鼠采血。以盲腸結(jié)扎穿孔法建立膿毒癥大鼠模型，膿毒癥模型組于造模后0.5小時(shí)經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水1ml，TGF-β1干預(yù)組于造模后0.5小時(shí)經(jīng)尾靜脈注射不同濃度的TGF-β1。

4、采用ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清中TNF-α、IL-10濃度變化，采血后活殺大鼠，留取大鼠肺臟、腎臟組織制備HE病理染色切片，觀察組織形態(tài)學(xué)改變。將收集的數(shù)據(jù)結(jié)果應(yīng)用SPSS20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，采用U檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)分析各組差異，當(dāng)P＜0.05時(shí)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:膿毒癥患者外周血TGF-β1含量與膿毒癥嚴(yán)重程度相關(guān)，膿毒癥越重，TGF-β1水平越高。隨著TGF-β1給藥濃度的增高，IL-10的水平也逐漸增高，高濃度的TG

5、F-β1可提高抗炎介質(zhì)IL-10的水平。不同濃度的TGF-β1對(duì)促炎因子TNF-α水平影響不同，當(dāng)TGF-β1濃度為50 ng/(ml·250g)時(shí)TNF-α水平升高，促進(jìn)TNF-α的合成，當(dāng)給藥濃度為100 ng/(ml·250g) TNF-α水平呈下降趨勢(shì)，抑制TNF-α的合成。對(duì)比CLP術(shù)后24h，TGF-β1干預(yù)組與膿毒癥模型組組織形態(tài)學(xué)變化發(fā)現(xiàn)在低劑量TGF-β1干預(yù)組腎臟、肺臟組織炎癥細(xì)胞浸潤較膿毒癥模型組加劇，組織細(xì)胞壞死