TGFβ-,1-對膿毒癥大鼠肝臟MD2表達的影響.pdf

1、目的： 建立大鼠膿毒癥模型，觀察不同時間點大鼠肝臟髓樣分化蛋白2(Myeloid Differential protein-2 MD2)表達情況和NF-κB含量動態(tài)變化，并給予外源性TGFβ1干預，探討TGFβ1對大鼠膿毒癥的作用及可能機制，為臨床膿毒癥的治療提供思路。 方法： 1、動物分組：健康雄性CL級SD大鼠120只，體重在220-250g，隨機編號分為三組。對照組(假手術(shù)組)：40只，按2h、6h、12h

2、、24h、48h時間點再分為5組，每組各8只。模型組(膿毒癥模型組)：40只，按2h、6h、12h、24h、48h時間點再分為5組，每組各8只：建立盲腸結(jié)扎穿孔模型(Cecal Ligation and Puncture CLP)，于造模后0.5h尾靜脈注射生理鹽水1ml/250g。TGFp組(TGFβ干預組)：40只，按2h、6h、12h、24h、48h時間點再分為5組，每組各8只：建立盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)模型，于造模后0.5h尾靜

3、脈注射TGFβ1 20ng/ml·250g。 2、標本取材：在各個時間點活殺大鼠，無菌取肝臟存放于離心管中，-80℃冰箱保存。待逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction RT-PCR)及免疫酶聯(lián)吸附法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ELISA)檢測使用。10％福爾馬林溶液固定肝臟組織，常溫保存，病理切片HE染色用。

4、 3、結(jié)果檢測：HE染色光鏡觀察肝臟組織形態(tài)改變：用ELISA法測肝臟組織勻漿上清液NF-кB含量；RT-PCR法檢測肝臟MD2mRNA的表達。 結(jié)果： 1、病理HE染色結(jié)果：對照組肝臟組織基本正常；模型組較對照組組織損傷嚴重，炎癥細胞浸潤多，伴有出血；TGFβ組較對照組仍有炎細胞浸潤，但較模型組炎癥細胞浸潤減少，損傷減輕。 2、ELISA法檢測NF-κB結(jié)果：NF-κB在對照組各個時間點之間無差異；模型組(

5、6h、12h、24h、48h)較對照組含量明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，并且在24h達到最高，48h進入平臺期。TGFβ組(6h、12h、24h)較模型組含量減少，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。 3．RT-PCR結(jié)果：MD2mRNA在對照組有少量表達，各個時間點之間無差異；在模型組(6h、12h、24h、48h)較對照組表達明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，并且在24h表達達到最高，48h進入平臺期：

6、TGFβ組(12h、24h)與模型組比較表達減少，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。 結(jié)論： 1、MD2mRNA在正常生理條件下可少量表達，膿毒癥時表達明顯增加，提示LPS信號轉(zhuǎn)導增強。 2、膿毒癥大鼠模型組NF-κB含量增加，提示炎癥介質(zhì)釋放增加，炎癥反應失控。 3、外源性應用TGFβ后，使膿毒癥大鼠肝臟MD2表達減少，NF-κB含量減少，提示TGFβ可能通過抑制LPS的信號轉(zhuǎn)導，減輕炎癥反應。但是TG