TGFβ-,1-對(duì)膿毒癥大鼠肝臟MD2表達(dá)的影響.pdf

1、目的： 建立大鼠膿毒癥模型，觀察不同時(shí)間點(diǎn)大鼠肝臟髓樣分化蛋白2(Myeloid Differential protein-2 MD2)表達(dá)情況和NF-κB含量動(dòng)態(tài)變化，并給予外源性TGFβ1干預(yù)，探討TGFβ1對(duì)大鼠膿毒癥的作用及可能機(jī)制，為臨床膿毒癥的治療提供思路。 方法： 1、動(dòng)物分組：健康雄性CL級(jí)SD大鼠120只，體重在220-250g，隨機(jī)編號(hào)分為三組。對(duì)照組(假手術(shù)組)：40只，按2h、6h、12h

2、、24h、48h時(shí)間點(diǎn)再分為5組，每組各8只。模型組(膿毒癥模型組)：40只，按2h、6h、12h、24h、48h時(shí)間點(diǎn)再分為5組，每組各8只：建立盲腸結(jié)扎穿孔模型(Cecal Ligation and Puncture CLP)，于造模后0.5h尾靜脈注射生理鹽水1ml/250g。TGFp組(TGFβ干預(yù)組)：40只，按2h、6h、12h、24h、48h時(shí)間點(diǎn)再分為5組，每組各8只：建立盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)模型，于造模后0.5h尾靜

3、脈注射TGFβ1 20ng/ml·250g。 2、標(biāo)本取材：在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)活殺大鼠，無(wú)菌取肝臟存放于離心管中，-80℃冰箱保存。待逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction RT-PCR)及免疫酶聯(lián)吸附法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ELISA)檢測(cè)使用。10％福爾馬林溶液固定肝臟組織，常溫保存，病理切片HE染色用。

4、 3、結(jié)果檢測(cè)：HE染色光鏡觀察肝臟組織形態(tài)改變：用ELISA法測(cè)肝臟組織勻漿上清液NF-кB含量；RT-PCR法檢測(cè)肝臟MD2mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1、病理HE染色結(jié)果：對(duì)照組肝臟組織基本正常；模型組較對(duì)照組組織損傷嚴(yán)重，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)多，伴有出血；TGFβ組較對(duì)照組仍有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，但較模型組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，損傷減輕。 2、ELISA法檢測(cè)NF-κB結(jié)果：NF-κB在對(duì)照組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間無(wú)差異；模型組(

5、6h、12h、24h、48h)較對(duì)照組含量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，并且在24h達(dá)到最高，48h進(jìn)入平臺(tái)期。TGFβ組(6h、12h、24h)較模型組含量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 3．RT-PCR結(jié)果：MD2mRNA在對(duì)照組有少量表達(dá)，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間無(wú)差異；在模型組(6h、12h、24h、48h)較對(duì)照組表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，并且在24h表達(dá)達(dá)到最高，48h進(jìn)入平臺(tái)期：

6、TGFβ組(12h、24h)與模型組比較表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 結(jié)論： 1、MD2mRNA在正常生理?xiàng)l件下可少量表達(dá)，膿毒癥時(shí)表達(dá)明顯增加，提示LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)。 2、膿毒癥大鼠模型組NF-κB含量增加，提示炎癥介質(zhì)釋放增加，炎癥反應(yīng)失控。 3、外源性應(yīng)用TGFβ后，使膿毒癥大鼠肝臟MD2表達(dá)減少，NF-κB含量減少，提示TGFβ可能通過抑制LPS的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，減輕炎癥反應(yīng)。但是TG