rhTNFR-FC對膿毒癥大鼠肝臟的保護(hù)作用.pdf

1、目的:研究益賽普(rhTNFR:Fc)對膿毒癥大鼠血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶(OCT)、肝臟組織中核因子-κB(NF-κB)的表達(dá)及肝臟組織功能損害的影響,探討 rhTNFR:Fc對膿毒癥大鼠的肝臟是否具有保護(hù)作用。
　　方法: SD大鼠90只,雌雄不拘,隨機(jī)分為3組:(1)對照組(n=30),膿毒癥組(n=30),治療組(n=30);(2)對照組大鼠于麻醉后開腹翻動(dòng)盲腸后關(guān)

2、腹,分別在術(shù)后6、12、24、36 h和48 h五個(gè)時(shí)相點(diǎn)從腹主動(dòng)脈抽取血標(biāo)本,采用酶聯(lián)免疫分析法檢測腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶(OCT);打開腹腔,采取黃豆大小肝臟組織,做蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)檢測肝臟NF-κB蛋白含量,再取少許肝組織行病理切片觀察肝臟組織炎癥變化情況。每個(gè)時(shí)相點(diǎn)6只大鼠。(3)膿毒癥組大鼠麻醉后行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP),制造膿毒癥大鼠模型,分別

3、于術(shù)后6、12、24、36 h和48 h五個(gè)時(shí)相點(diǎn)行與對照組相同的操作步驟。每個(gè)時(shí)相點(diǎn)6只大鼠。(4)治療組大鼠行CLP,術(shù)后立即經(jīng)尾靜脈注射rhTNFR:Fc0.5mg/kg,分別于術(shù)后6、12、24、36 h和48 h五個(gè)時(shí)相點(diǎn)行與膿毒癥組相同的操作步驟。每個(gè)時(shí)相點(diǎn)6只大鼠。(5)所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析,組間比較行單因素方差分析,相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。
　　結(jié)果:
　　1.血

4、清TNF-α水平變化:膿毒癥組、治療組血清TNF-α水平在術(shù)后6 h時(shí)相點(diǎn)為最大值,隨著時(shí)間推移,兩組濃度水平呈下降趨勢,但仍高于對照組,在CLP術(shù)后各時(shí)相點(diǎn),膿毒癥組及治療組與對照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。治療組血清TNF-α水平較膿毒癥組低,在術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)與膿毒癥組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.血清IL-1水平變化:膿毒癥組和治療組血清IL-1水平在術(shù)后6 h時(shí)相點(diǎn)為最大值,隨著時(shí)間推移,兩

5、組濃度水平呈下降趨勢,但仍高于假手術(shù)對照組,在CLP術(shù)后各時(shí)相點(diǎn),膿毒癥組及治療組與對照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。治療組血清IL-1水平較膿毒癥組低,在術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)與膿毒癥組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.血清OCT水平變化:膿毒癥組和治療組在CLP術(shù)后6 h血清OCT水平即明顯升高,與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),治療組血清中OCT水平較膿毒癥組低,在術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)與膿毒癥組比較差異

6、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.病理切片結(jié)果顯示:正常對照組肝臟組織形態(tài)、結(jié)構(gòu)完整,未見炎癥細(xì)胞浸潤;膿毒癥組肝細(xì)胞腫脹變性,局灶性肝細(xì)胞壞死,廣泛淤血,匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤明顯;益賽普藥物治療組病變明顯較膿毒癥組減輕。
　　5.Western-blot結(jié)果顯示:膿毒癥組的電泳條帶的面積明顯大于治療組和對照組,顏色也較治療組和對照組偏深。治療組的電泳條帶的面積和顏色深度高于對照組,但較膿毒癥組低。
　　6.TN

7、F-α、IL-1及OCT之間的相關(guān)性分析結(jié)果:
　　1).TNF-α與OCT具有顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.946,P<0.01;
　　2).OCT與IL-1具有顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.978,P<0.01;
　　3).TNF-α與IL-1具有顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.974,P<0.01。
　　結(jié)論:
　　1.肝臟組織NF-κB蛋白的表達(dá)量增加以及病理切片結(jié)果均提示膿毒癥大鼠肝臟組織中存在炎癥反應(yīng)過程;同

8、時(shí)OCT升高,表示肝臟在膿毒癥早期即發(fā)生損傷。
　　2.膿毒癥大鼠血清中TNF-α、IL-1等炎癥因子異常升高,是引起全身炎癥反應(yīng)和膿毒癥引起肝臟炎性損傷的主要因子。
　　3.rhTNFR:Fc可以減少膿毒癥大鼠血清中TNF-α、IL-1等炎癥因子的釋放,也降低了核因子-κB(NF-κB)在肝臟組織中的表達(dá),可能是干擾了由膿毒癥引起的肝臟炎癥反應(yīng)的核心環(huán)節(jié),從而減輕肝臟的炎性損傷。
　　4.rhTNFR:Fc作為TNF