脂聯(lián)素對(duì)膿毒癥大鼠的肺保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述。
　　第一部分 脂聯(lián)素對(duì)膿毒癥大鼠肺損傷及炎癥介質(zhì)的影響
　　目的:
　　探討脂聯(lián)素(APN)對(duì)膿毒癥大鼠肺損傷及炎癥介質(zhì)的影響。
　　方法:
　　采用CLP法建立膿毒癥模型。雄性Wistar大鼠54只,隨機(jī)分為對(duì)照組(C組)、膿毒癥模型組(CLP組)、APN預(yù)處理組(APN組)。各組隨機(jī)抽取8只大鼠行5天生存率分析。APN組于CLP前12hi.p.APN(6mg/kg)。CLP

2、后動(dòng)脈血?dú)夥治觥y(cè)定血漿TNF-α、IL-6、HMGB1水平及血清 ALT、AST、BUN、Cr、CK濃度;測(cè)定肺W/D比值,觀察肺組織病理變化及肺損傷病理學(xué)評(píng)分;檢測(cè)肺泡灌洗液(BALF)中總蛋白含量、白細(xì)胞總數(shù)和分類以及TNF-α、IL-6水平;檢測(cè)肺組織MPO、SOD及HMGB1 mRNA水平。
　　結(jié)果:
　　1、與C組比較,CLP和APN組大鼠5天生存率和血?dú)釶aO2均下降(P<0.05);血漿TNF-α、IL-6

3、和HMGB1水平及血清生化指標(biāo)均升高(P<0.05);肺W/D比值、肺損傷病理學(xué)評(píng)分升高(P<0.05);BALF中蛋白含量、白細(xì)胞總數(shù)和 PMN％及TNF-α、IL-6水平均升高(P<0.05);肺組織SOD活性下降(P<0.05),MPO活性和HMGB1 mRNA水平表達(dá)均升高(P<0.05)。
　　2、與CLP組比較,APN組大鼠5天生存率及血?dú)釶aO2升高(P<0.05);血漿TNF-α、IL-6和HMGB1水平及血清生化

4、指標(biāo)降低(P<0.05);肺W/D比值、肺損傷病理學(xué)評(píng)分均下降(P<0.05);BALF中蛋白含量、白細(xì)胞總數(shù)和PMN％及TNF-α、IL-6水平均下降(P<0.05);肺組織SOD活性升高(P<0.05),MPO活性及HMGB1 mRNA水平均有所下降(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　APN通過(guò)減少肺水含量,減輕肺病理?yè)p傷程度,抑制中性粒細(xì)胞聚集,提高膿毒癥大鼠生存率,抑制炎癥因子的釋放,對(duì)膿毒癥大鼠肺損傷具有保護(hù)作用。

5、
　　第二部分 脂聯(lián)素通過(guò)IL-6及JAK2/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響膿毒癥大鼠肺損傷的研究
　　目的:
　　觀察脂聯(lián)素是否通過(guò)抑制IL-6/JAK/STAT通路中的作用位點(diǎn)發(fā)揮對(duì)膿毒癥大鼠肺組織的保護(hù)作用。
　　方法:
　　選用120只雄性Wistar大鼠,隨機(jī)分為:對(duì)照組(C組)、膿毒癥模型組(CLP組)、脂聯(lián)素組(APN組)、脂聯(lián)素+抗IL-6單克隆抗體組(APN+ANTI-IL-6組)、脂聯(lián)素+雷

6、帕霉素組(APN+RPM組)。APN組、APN+ANTI-IL-6組及APN+RPM組于CLP前12hi.p. APN(6mg/kg)。APN+ANTI-IL-6組大鼠于CLP前1hi.p. ANTI-IL-6(0.5mg/kg)。APN+RPM組于CLP前1hi.p.RPM(0.4mg/kg)。各組隨機(jī)抽取8只大鼠行5d生存率分析。CLP后各組隨機(jī)抽取10只大鼠進(jìn)行肺組織病理學(xué)檢查,測(cè)定各組肺W/D比;肺組織MPO活性;使用ELISA

7、測(cè)定血漿TNF-α、IL-6和HMGB1水平;使用EMSA測(cè)定肺組織STAT3 DNA結(jié)合活性;Real-time PCR測(cè)定肺組織TLR4 mRNA及HMGB1 mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、與C組比較,CLP組、APN組、APN+ANTI-IL-6組、APN+RPM組大鼠5d生存率降低(P<0.05),血漿TNF-α、IL-6和HMGB1水平顯著升高(P<0.05),肺損傷病理學(xué)評(píng)分、肺組織W/D比、MPO活性

8、、STAT3 DNA結(jié)合活性以及TLR4 mRNA、HMGB1 mRNA水平在CLP后均增加(P<0.05)。
　　2、與CLP組比較,APN組和APN+RPM組5d生存率升高(P<0.05),APN組、APN+ANTI-IL-6組、APN+RPM組血漿 TNF-α、IL-6和HMGB1水平,肺損傷病理學(xué)評(píng)分、肺組織 W/D比、MPO活性、STAT3 DNA結(jié)合活性、TLR4 mRNA水平以及HMGB1 mRNA水平均降低(P<0

9、.05)。
　　3.與 APN組比較, APN+ANTI-IL-6組和 APN+RPM組5d生存率降低(P<0.05)。APN+ANTI-IL-6組、APN+RPM組血漿 TNF-α、IL-6和 HMGB1水平、肺損傷病理學(xué)評(píng)分、肺W/D比、MPO活性、STAT3 DNA結(jié)合活性以及TLR4 mRNA、HMGB1 mRNA水平均增高(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　脂聯(lián)素通過(guò)抑制膿毒癥大鼠IL-6及STAT3的表達(dá),

10、影響膿毒癥肺損傷及炎癥反應(yīng)。給予ANTI-IL-6及RPM干預(yù)后膿毒癥大鼠肺組織STAT3和TRL4 mRNA表達(dá)水平升高,炎癥反應(yīng)及肺損傷加重。提示脂聯(lián)素的肺保護(hù)作用可能與抑制IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)通路有關(guān)。
　　第三部分 脂聯(lián)素介導(dǎo)IL-10/HO-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響膿毒癥大鼠急性肺損傷及機(jī)制研究
　　目的:
　　研究IL-10/HO-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在脂聯(lián)素影響膿毒癥大鼠急性肺損傷中的作用,探討脂聯(lián)素肺

11、保護(hù)的可能分子機(jī)制。
　　方法:
　　采用CLP法建立膿毒癥模型。100只雄性Wistar大鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組(C組)、膿毒癥模型組(CLP組)、APN預(yù)處理組(APN組)、IL-10預(yù)處理組(IL-10組)和ZnPPIX干預(yù)組(Zn組)。APN組于CLP前12hi.p. APN(6mg/kg),Zn組于APN前12hi.p. ZnPPIX(10 mg/kg),IL-10組在APN前30min i.p. IL-10(1μg/

12、kg)。各組隨機(jī)抽取10只大鼠進(jìn)行5天生存率分析。CLP后動(dòng)脈血?dú)夥治?測(cè)定肺W/D比,HE染色觀察肺組織病理變化及肺損傷病理學(xué)評(píng)分;檢測(cè)BALF中總蛋白含量、白細(xì)胞總數(shù)和分類以及TNF-α、IL-6水平;檢測(cè)肺組織MPO、SOD活性及IL-10、 HO-1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、與C組比較,CLP組、APN組和Zn組大鼠5d生存率及血?dú)釶aO2均下降(P<0.05);肺W/D比、肺損傷病理學(xué)評(píng)分均升高(P<0.05

13、);BALF中蛋白含量、白細(xì)胞總數(shù)和 PMN％及TNF-α、IL-6水平均升高(P<0.05);肺組織SOD活性下降,MPO活性升高(P<0.05)。IL-10組上述指標(biāo)及生存率與 C組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2、與CLP組比較,APN組、Zn組和IL-10組血?dú)釶aO2均升高(P<0.05);肺W/D比、肺損傷病理學(xué)評(píng)分均下降(P<0.05);BALF中蛋白含量、白細(xì)胞總數(shù)和 PMN％及 TNF-α、IL

14、-6水平均下降(P<0.05);肺組織 SOD活性升高,MPO活性下降(P<0.05)。
　　3、與C組比較,CLP組、APN組、IL-10組和 Zn組肺組織IL-10和HO-1蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05);其中APN組和IL-10組肺組織IL-10和HO-1蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)。
　　4、與APN組比較,Zn組血?dú)釶aO2下降(P<0.05);肺W/D比、肺損傷病理學(xué)評(píng)分均升高(P<0.05);BALF

15、中蛋白含量、白細(xì)胞總數(shù)和PMN％及TNF-α、IL-6水平均升高(P<0.05);肺組織SOD活性下降(P<0.05),MPO活性升高(P<0.05)。而IL-10組血?dú)釶aO2升高(P<0.05);肺W/D比、肺損傷病理學(xué)評(píng)分均降低(P<0.05);BALF中蛋白含量、白細(xì)胞總數(shù)和PMN％及 TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.05);肺組織 SOD活性升高,MPO活性降低(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、APN