胰島素對(duì)早期膿毒癥大鼠肝臟NLRP3炎癥小體的表達(dá)影響及其作用機(jī)制.pdf

1、研究目的:
　　膿毒癥指的是因感染所引起的全身炎性反應(yīng)綜合癥(systemic inflammationresponse syndrome，SIRS)，證實(shí)有細(xì)菌或者高度可疑的感染灶。由于病情進(jìn)展迅猛，SIRS可快速發(fā)展為多器官功能障礙綜合征(MODS)。在膿毒癥中首當(dāng)其沖受到損害的人體器官就是我們的肝臟，肝臟在多器官功能障礙綜合征的形成與發(fā)展變化中發(fā)揮著重要的作用，急性肝損傷可發(fā)生于膿毒癥的任何階段。NLRP3炎癥小體可以啟動(dòng)固

2、有免疫反應(yīng)防御病原微生物感染，同時(shí)還參與包括膿毒癥在內(nèi)的多種炎性疾病的發(fā)生和發(fā)展。它通過(guò)激活半胱天冬酶(Caspase-1)促進(jìn)IL-1β和IL-18的成熟和分泌，進(jìn)而引起機(jī)體一系列炎癥反應(yīng)。胰島素不僅具有降糖的作用，還具有減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)、抗炎等功效，但其具體作用機(jī)制并不明確。推測(cè)，胰島素可能通過(guò)減輕肝組織氧化應(yīng)激反應(yīng)調(diào)控ROS的生成，控制NLRP3炎癥小體活化和炎癥反應(yīng)，從而發(fā)揮保護(hù)作用。
　　本研究采用盲腸結(jié)扎穿孔法(CLP

3、)制備膿毒癥模型，觀(guān)察胰島素對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)和NLRP3炎癥小體的表達(dá)影響，從而證實(shí)胰島素對(duì)膿毒癥早期肝功能的保護(hù)作用。0
　　研究方法:
　　采用CLP的方法建立膿毒癥大鼠模型，將36只SPF級(jí)SD雄性大鼠隨機(jī)分為6組，每組6只:正常組、假手術(shù)組、膿毒癥模型12h組（CLP12h組）、膿毒癥模型24h組（CLP24h組）、胰島素干預(yù)12h組（CLP+INS12h組）、胰島素干預(yù)24h組（CLP+INS24h組），胰島素干預(yù)組

4、予胰島素0.5IU/KG劑量皮下注射，在12h、24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀(guān)察大鼠血糖指標(biāo)和肝組織病理組織學(xué)改變，采用Western Blot、Real time RT-PCR、HE染色、酶活性檢測(cè)等方法檢測(cè)正常組、假手術(shù)組、CLP組和胰島素干預(yù)組的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活力、活性氧(ROS)水平、NLRP3和Caspase-1mRNA相對(duì)表達(dá)量、NLRP3蛋白相對(duì)

5、表達(dá)量、Caspase-1活性以及白介素-1β(IL-1β)水平。
　　研究結(jié)果：
　　1.CLP術(shù)后大鼠血糖指標(biāo)、ALT、AST、MDA、ROS、NLRP3和Caspase-1mRNA相對(duì)表達(dá)量、NLRP3蛋白相對(duì)表達(dá)量、Caspase-1活性水平、IL-1β水平顯著升高，SDO活力水平明顯下降，肝組織病理?yè)p害明顯，膿毒癥癥狀明顯，說(shuō)明制備的膿毒癥大鼠模型是成功的。
　　2.予胰島素干預(yù)處理后膿毒癥大鼠癥狀減輕，在同

6、一時(shí)間點(diǎn)跟CLP組比較，血糖指標(biāo)、ALT、AST、MDA、ROS、NLRP3和Caspase-1mRNA相對(duì)表達(dá)量、NLRP3蛋白相對(duì)表達(dá)量、Caspase-1活性水平、IL-1β水平均明顯降低，而SOD活性水平明顯升高，表明胰島素可以減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，抑制ROS的產(chǎn)生，從而減少NLRP3炎癥小體的活化釋放，減輕炎性反應(yīng)，對(duì)膿毒癥早期肝臟具有保護(hù)作用。
　　研究結(jié)論：
　　1.膿毒癥早期可引起肝功能損傷;
　　2.胰島