脊髓NLRP3炎癥小體對神經(jīng)病理性疼痛的影響及機制.pdf

1、目的：
　　通過抑制NLRP3炎癥小體，觀察坐骨神經(jīng)慢性壓榨性損傷(chronic constriction injury,CCI)模型大鼠機械痛敏變化，探討NLRP3炎癥小體對神經(jīng)病理性疼痛的影響及機制。
　　方法：
　　Sprague-Dawley雄性大鼠36只，8周齡，體重250～300g，隨機分為4組（n=9）：假手術組（control組）、慢性坐骨神經(jīng)壓榨性損傷組（CCI組）、溶劑對照組（CCI-vehicl

2、e組）和抑制劑組（CCI-MCC950組）。分別于建模前1d、建模后1、4和7d測定機械縮足反應閾（MWT）；CCI-vehicle組和CCI-MCC950組于建模后4d測定MWT后分別鞘內(nèi)注射等容積生理鹽水和MCC950溶液，每天1次，連續(xù)3天；于建模后7d MWT測量后處死大鼠取L4-6脊髓組織，采用Western blot法測定脊髓組織NLRP3、ASC、caspase-1及IL-1β蛋白表達，采用實時熒光定量PCR法測定脊髓組織

3、NLRP3、ASC、caspase-1及IL-1βmRNA表達，采用TdT介導dUTP末端標記法（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling, TUNEL）檢測脊髓組織凋亡細胞，采用免疫熒光雙標法觀察脊髓組織NLRP3與GFAP共表達。
　　結果：
　　與control組比較，CCI組、CCI-vehicle組和CCI-MCC950組MWT顯著降低（P＜0.05），NLRP3、ASC、caspas

4、e-1和IL-1β蛋白和mRNA表達上調(diào)（P＜0.05）,凋亡陽性細胞數(shù)升高（P＜0.05）；與CCI組、CCI-vehicle組比較，CCI-MCC950組經(jīng)MCC950處理后MWT升高（P＜0.05），且脊髓組織NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白和mRNA表達下調(diào)（P＜0.05），凋亡陽性細胞數(shù)減少（P＜0.05）。免疫熒光雙標結果顯示：NLRP3蛋白主要表達于脊髓星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元胞漿。
　　結論：