核因子-κB對(duì)神經(jīng)病理性疼痛及其脊髓免疫炎癥因子表達(dá)的調(diào)節(jié).pdf

1、目的： 1.觀察鞘內(nèi)注射核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclearfactor-kappaB，NF-κB）抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）對(duì)坐骨神經(jīng)慢性擠壓傷（chronicconstrictioninjury，CCI）大鼠痛閾和脊髓NF-κBp-p65、小膠質(zhì)細(xì)胞活性、CX3CR1、p-p38MAPK、TNFα表達(dá)的影響。 2.觀察NF-κB抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）對(duì)體外TNFα誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞CX3CR1基因

2、和蛋白表達(dá)的影響。 3.觀察鞘內(nèi)注射白藜蘆醇（Resveratrol，Res）對(duì)坐骨神經(jīng)慢性擠壓傷（CCI）大鼠痛閾和脊髓NF-κBp-p65、小膠質(zhì)細(xì)胞活性、CX3CR1、TNFα表達(dá)的調(diào)節(jié)，并探討其對(duì)臨床疼痛治療的機(jī)制。 方法： 1.288只成年雄性SD大鼠，體質(zhì)量250～300g，鞘內(nèi)置管成功后，隨機(jī)分8組（n=36）：正常對(duì)照組：實(shí)驗(yàn)大鼠不做任何處置；假手術(shù)組：僅暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)不結(jié)扎；假手術(shù)+PDTC組

3、：假手術(shù)處理大鼠并經(jīng)鞘內(nèi)置管注入PDTC1000pmol/d；CCI組：大鼠CCI手術(shù)處理；CCI+PDTC組1：CCI處理大鼠分為2個(gè)亞組，分別在CCI術(shù)前1天和CCI第3天開始經(jīng)鞘內(nèi)置管注入PDTC100pmol/d；CCI+PDTC組2：CCI處理大鼠分為2個(gè)亞組，分別在術(shù)前1天和CCI第3天開始鞘內(nèi)注入PDTC1000pmol/d；假手術(shù)+鹽水組：假手術(shù)處理大鼠并鞘內(nèi)注入生理鹽水；CCI+鹽水組：CCI術(shù)處理大鼠并經(jīng)鞘內(nèi)注入生理

4、鹽水。鞘內(nèi)置管5d后按每組處理不同，開始鞘內(nèi)輸注生理鹽水和不同劑量的PDTC，鞘內(nèi)注射1d后分別建立大鼠CCI神經(jīng)病理性疼痛模型和假手術(shù)模型，測(cè)定大鼠的痛敏值，并在鞘內(nèi)注射4d后取脊髓腰膨大部進(jìn)行免疫組化測(cè)定NF-κBp-p65、OX42、TNFα表達(dá)、WesternBlot檢測(cè)CX3CR1、p-p38MAPK蛋白表達(dá)、RT-PCR檢測(cè)CX3CR1mRNA的表達(dá)、并且進(jìn)行脊髓切片HE染色。 2.采用體外培養(yǎng)的永生態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞BV

5、-2細(xì)胞，設(shè)立對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組經(jīng)TNFα（20ng/ml）、TNFα+PDTC、PDTC孵育，于10min，20min，40min，60min，2h，3h，4h，6h，8h采用MTT方法和倒置顯微鏡分別測(cè)定小膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)率及形態(tài)改變，免疫細(xì)胞化學(xué)測(cè)定NF-κBp-p65表達(dá)，Westernblot和RT-PCR檢測(cè)CX3CR1蛋白和mRNA表達(dá)情況。 3.252只成年雄性SD大鼠，體質(zhì)量250～300g，鞘內(nèi)置管成功后，

6、隨機(jī)分7組（n=36）：正常對(duì)照組：實(shí)驗(yàn)大鼠不做任何處置；假手術(shù)組：僅暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)不結(jié)扎；假手術(shù)+Res組：假手術(shù)處理大鼠經(jīng)鞘內(nèi)置管注入Res；CCI組；CCI+Res組：大鼠分為2個(gè)亞組，分別在CCI術(shù)前1天和CCI第3天開始經(jīng)鞘內(nèi)置管注入Res500ug/d；假手術(shù)+鹽水組：假手術(shù)處理大鼠并鞘內(nèi)注入生理鹽水；CCI+鹽水組：CCI術(shù)處理大鼠并經(jīng)鞘內(nèi)注入生理鹽水。按各組處理，鞘內(nèi)置管Sd后開始分別鞘內(nèi)輸注生理鹽水和Res，鞘內(nèi)注射

7、1d后分別建立大鼠CCI神經(jīng)病理性疼痛模型和假手術(shù)模型，測(cè)定大鼠的痛敏值，并在鞘內(nèi)注射4d后取脊髓腰膨大部進(jìn)行免疫組化測(cè)定NF-κBp-p65、OX42、TNFα表達(dá)、WesternBlot檢測(cè)CX3CR1蛋白表達(dá)、并進(jìn)行脊髓切片HE染色。 結(jié)果： 1.CCI組與sham組比較大鼠術(shù)后各時(shí)點(diǎn)痛敏閾值明顯下降，并在術(shù)后第3日降至最低點(diǎn)（P<0.05），脊髓CX3CR1、p-p38MAPK、p-p65、OX42、TNFα的表

8、達(dá)明顯升高（P<0.05）。PDTC+CCI組與CCI組比較，術(shù)后各時(shí)點(diǎn)大鼠痛敏閾值增高，脊髓CX3CR1、p-p38MAPK、p-p65、OX42、TNFα的表達(dá)下降（P<0.05）。HE染色假手術(shù)+PDTC組與假手術(shù)+鹽水組比較，未見明顯脊髓組織病理損傷。 2.TNFα刺激后BV-2細(xì)胞形態(tài)突起增粗；刺激20min內(nèi)NF-κBp-p65核表達(dá)細(xì)胞顯著增多（P<0.05），1h達(dá)高峰，TNFα誘導(dǎo)的CX3CR1蛋白和mRNA表

9、達(dá)分別于4h和2h達(dá)到高峰，PDTC（100μmol/l）可抑制TNFα誘導(dǎo)的NF-κBp-p65核表達(dá)，明顯降低了TNFα誘導(dǎo)的CX3CR1蛋白和mRNA表達(dá)。 3.CCI組與sham組比較大鼠術(shù)后各時(shí)點(diǎn)痛敏閾值明顯下降，并在術(shù)后第3日降至最低點(diǎn)（P<0.05），脊髓CX3CR1、p-p65、OX42、TNFα的表達(dá)明顯升高（P<0.05）。Res+CCI組與CCI組比較，術(shù)后各時(shí)點(diǎn)大鼠痛敏閾值增高，脊髓CX3CR1、p-p6

10、5、OX42、TNFα的表達(dá)下降（P<0.05）。HE染色假手術(shù)+Res組與假手術(shù)+鹽水組比較，未見明顯脊髓組織病理損傷。 結(jié)論： 1.鞘內(nèi)給予PDTC可劑量依賴性地減輕CCI大鼠的病理性疼痛，并抑制脊髓CX3CR1、p-p38MAPK、p-p65、TNFα的表達(dá)和小膠質(zhì)細(xì)胞活性。活化NF-κB通路可能通過上調(diào)脊髓CX3CR1、p-p38MAPK、TNFα的表達(dá)和小膠質(zhì)細(xì)胞活性而參與了神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生。 2.