椎間盤纖維環(huán)交感神經(jīng)分布特點(diǎn)與青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸發(fā)病的相關(guān)研究.pdf

1、青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸(Adolescent Idiopathic Scoliosis,AIS)是一種常見的復(fù)雜的脊柱三維畸形,其病因非常復(fù)雜,國內(nèi)外學(xué)者在基因遺傳、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、脊柱的骨骼肌肉系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)等諸多方面進(jìn)行了深入研究,但仍然沒有找到AIS的確切病因。椎間盤是脊柱的重要組成部分,在脊柱的生長發(fā)育、三維平衡中有不容忽視的作用,因此椎間盤一直是AIS病因?qū)W研究中廣大學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。以前人們對椎間盤的研究主要集中在椎間盤的營

2、養(yǎng)代謝、膠原纖維的類型等方面,仍然沒有明確AIS的真正病因,但研究發(fā)現(xiàn)椎間盤周圍分布有大量的神經(jīng)纖維,椎間盤周圍的神經(jīng)主要來源于交感干及脊神經(jīng)的分支,大部分神經(jīng)纖維應(yīng)該為交感神經(jīng)纖維,但以前沒有對椎間盤不同部位纖維環(huán)的交感神經(jīng)分布進(jìn)行研究的報(bào)道。本課題組設(shè)想AIS患者椎間盤纖維環(huán)的交感神經(jīng)分布如果和正常人不同則可能和AIS相關(guān),但難以明確兩者之間的因果關(guān)系,因此本課題組設(shè)計(jì)一系列實(shí)驗(yàn)來研究椎間盤纖維環(huán)交感神經(jīng)的分布與AIS發(fā)病的相關(guān)性,

3、探討AIS的發(fā)病原因,為AIS的早期臨床診治提供理論依據(jù)。 目的： 1、建立符合本課題要求的山羊脊柱側(cè)凸模型； 2、探討脊柱逐漸形成側(cè)凸的這個(gè)形態(tài)學(xué)改變是否會引起椎間盤纖維環(huán)的交感神經(jīng)分布發(fā)生改變； 3、探討椎間盤纖維環(huán)的交感神經(jīng)分布與AIS發(fā)病的相關(guān)性。 方法： 1、第一部分以13只未成年山羊?yàn)檠芯繉ο?顯露山羊胸腰段脊柱后結(jié)構(gòu),通過椎弓根螺釘系統(tǒng)跨節(jié)段原位固定山羊一側(cè)椎弓根,手術(shù)即刻不

4、施加外力、利用未成年山羊的生長潛能自然生長形成脊柱側(cè)凸； 2、第二部分以12只未成年山羊?yàn)檠芯繉ο?將12只山羊分為NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色組和乙醛酸染色組,將椎間盤分為左側(cè)前方、左側(cè)后方、右側(cè)前方、右側(cè)后方四個(gè)區(qū),取山羊T13/L1椎間盤纖維環(huán)標(biāo)本,將其中6只山羊T13/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標(biāo)本進(jìn)行冰凍切片、NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色,使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析,以明確椎間盤不同

5、部位纖維環(huán)上是否存在神經(jīng)纖維分布及其特點(diǎn)；將另外6只山羊T13/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標(biāo)本進(jìn)行冰凍切片、乙醛酸染色,使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析,整理數(shù)據(jù)運(yùn)用SRS 9.1.3版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,最終明確正常山羊椎間盤不同部位纖維環(huán)的交感神經(jīng)纖維分布特點(diǎn)。 3、第三部分以12只側(cè)凸山羊模型為研究對象,將12只側(cè)凸山羊分為NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色組和乙醛酸染色組,將椎間盤分為凸側(cè)前方、

6、凸側(cè)后方、凹側(cè)前方、凹側(cè)后方四個(gè)區(qū),取側(cè)凸山羊頂椎區(qū)椎間盤(T13/L1)纖維環(huán)標(biāo)本,將其中6只側(cè)凸山羊T13/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標(biāo)本進(jìn)行冰凍切片、NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色,使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析,以明確側(cè)凸山羊項(xiàng)椎區(qū)椎間盤不同部位纖維環(huán)上是否存在神經(jīng)纖維分布及其特點(diǎn)；將另外6只側(cè)凸山羊T13/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標(biāo)本進(jìn)行冰凍切片、乙醛酸染色,使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察、攝片,并通過圖像

7、分析軟件進(jìn)行圖像分析,整理數(shù)據(jù)運(yùn)用SRS 9.1.3版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,最終明確側(cè)凸山羊頂椎區(qū)椎間盤不同部位纖維環(huán)的交感神經(jīng)纖維分布特點(diǎn)。 4、第四部分以12具正常青少年尸體標(biāo)本的T12/L1椎間盤纖維環(huán)為研究對象,將12個(gè)椎間盤標(biāo)本分為NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色組和乙醛酸染色組,將椎間盤分為左側(cè)前方、左側(cè)后方、右側(cè)前方、右側(cè)后方四個(gè)區(qū),將其中6個(gè)正常人T12/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標(biāo)本進(jìn)行冰凍切片、NF200常規(guī)熒

8、光組織化學(xué)染色,使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析,以明確正常人椎間盤不同部位纖維環(huán)上是否存在神經(jīng)纖維分布及其特點(diǎn)；將另外6個(gè)正常人T12/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標(biāo)本進(jìn)行冰凍切片、乙醛酸染色,使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析,整理數(shù)據(jù)運(yùn)用SRS 9.1.3版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,最終明確正常人椎間盤不同部位纖維環(huán)的交感神經(jīng)纖維分布特點(diǎn)。 5、第五部分以12例AIS患者頂椎

9、區(qū)椎間盤纖維環(huán)為研究對象,將12例AIS患者分為NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色組和乙醛酸染色組,將椎間盤分為凸側(cè)前方、凸側(cè)后方、凹側(cè)前方、凹側(cè)后方四個(gè)區(qū),將其中6例AIS患者頂椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標(biāo)本進(jìn)行冰凍切片、NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色,使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析,以明確AIS患者頂椎區(qū)椎間盤不同部位纖維環(huán)上是否存在神經(jīng)纖維分布及其特點(diǎn)；將另外6例AIS患者頂椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標(biāo)本進(jìn)行

10、冰凍切片、乙醛酸染色,使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析,整理數(shù)據(jù)運(yùn)用SRS9.1.3版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,最終明確AIS患者頂椎區(qū)椎間盤不同部位纖維環(huán)的交感神經(jīng)纖維分布特點(diǎn)。 結(jié)果： 1、第一部分：1只山羊因麻醉藥物過量死亡,另外12只山羊建模成功。術(shù)后即刻Cobb角為0°,術(shù)后2個(gè)月Cobb角為16.34±1.07°(14.5°～17.8°),術(shù)后3個(gè)月Cobb角為21.06±1.09°

11、(19.2°～22.4°)。隨著時(shí)間的延長,側(cè)凸Cobb角不斷增大。術(shù)后2個(gè)月和術(shù)后3個(gè)月Cobb角進(jìn)行t檢驗(yàn),P<0.0001。 2、第二部分:NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色組,將所測得正常山羊椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進(jìn)行t檢驗(yàn),左側(cè)前方和右側(cè)前方、左側(cè)后方和右側(cè)后方、左側(cè)前方和左側(cè)后方、右側(cè)前方和右側(cè)后方、左側(cè)和右側(cè)椎間盤纖維環(huán)的神經(jīng)分布無顯著差異(P>0.05);乙醛酸染色組,將所測得正常山羊椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進(jìn)

12、行t檢驗(yàn),左側(cè)前方和右側(cè)前方、左側(cè)后方和右側(cè)后方、左側(cè)前方和左側(cè)后方、右側(cè)前方和右側(cè)后方、左側(cè)和右側(cè)椎間盤纖維環(huán)的交感神經(jīng)分布無顯著差異(P>0.05)。 3、第三部分:NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色組,將所測得側(cè)凸山羊頂椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進(jìn)行t檢驗(yàn),凸側(cè)前方和凹側(cè)前方、凸側(cè)后方和凹側(cè)后方、凸側(cè)前方和凸側(cè)后方、凹側(cè)前方和凹側(cè)后方、凸側(cè)和凹側(cè)椎間盤纖維環(huán)的神經(jīng)分布無顯著差異(P>0.05);乙醛酸染色組,將所測得側(cè)凸山

13、羊頂椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進(jìn)行t檢驗(yàn),凸側(cè)前方和凹側(cè)前方、凸側(cè)后方和凹側(cè)后方、凸側(cè)前方和凸側(cè)后方、凹側(cè)前方和凹側(cè)后方、凸側(cè)和凹側(cè)椎間盤纖維環(huán)的交感神經(jīng)分布無顯著差異(P>0.05)。 4、第四部分:NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色組,將所測得正常人椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進(jìn)行t檢驗(yàn),左側(cè)前方和右側(cè)前方、左側(cè)后方和右側(cè)后方、左側(cè)前方和左側(cè)后方、右側(cè)前方和右側(cè)后方、左側(cè)和右側(cè)椎間盤纖維環(huán)的神經(jīng)分布無顯著差異(P>0.05);

14、乙醛酸染色組,將所測得正常人椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進(jìn)行t檢驗(yàn),左側(cè)前方和右側(cè)前方、左側(cè)后方和右側(cè)后方、左側(cè)前方和左側(cè)后方、右側(cè)前方和右側(cè)后方、左側(cè)和右側(cè)椎間盤纖維環(huán)的交感神經(jīng)分布無顯著差異(P>0.05)。 5、第五部分:NF200常規(guī)熒光組織化學(xué)染色組,將所測得AIS患者頂椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進(jìn)行t檢驗(yàn),凸側(cè)前方和凸側(cè)后方、凹側(cè)前方和凹側(cè)后方纖維環(huán)神經(jīng)分布無顯著差異(P>0.05),凸側(cè)前方和凹側(cè)前方、凸側(cè)后方和

15、凹側(cè)后方、凸側(cè)和凹側(cè)椎間盤纖維環(huán)的神經(jīng)分布有顯著差異(P<0.05);乙醛酸染色組,將所測得AIS患者項(xiàng)椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進(jìn)行t檢驗(yàn),凸側(cè)前方和凸側(cè)后方、凹側(cè)前方和凹側(cè)后方椎間盤纖維環(huán)神經(jīng)分布無顯著差異(P>0.05),凸側(cè)前方和凹側(cè)前方、凸側(cè)后方和凹側(cè)后方、凸側(cè)和凹側(cè)椎間盤纖維環(huán)的交感神經(jīng)分布有顯著差異(P<0.05)。 結(jié)論： 1、單側(cè)椎弓根螺釘原位固定可以成功的建立山羊脊柱側(cè)凸模型； 2、脊柱在