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1、[目的]研究固本防喘膠囊對(duì)哮喘動(dòng)物模型氣道炎性細(xì)胞(主要是嗜酸性粒細(xì)胞)凋亡的影響,及其分子調(diào)控機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 [方法]體重200-250g雌性豚鼠50只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、西藥對(duì)照(地塞米松)組、中藥小劑量治療組、中藥大劑量治療組,每組10只。模型組、西藥對(duì)照(地塞米松)組、中藥小劑量治療組、中藥大劑量治療組采用卵蛋白誘導(dǎo)法建立哮喘模型,在實(shí)驗(yàn)第1天,臨時(shí)配制10%卵蛋白生理鹽水溶液,豚鼠腹腔注射1毫
2、升以致敏;第15天將致敏的豚鼠置于14升透明玻璃鐘罩內(nèi),噴射霧化器將1%卵蛋白生理鹽水對(duì)豚鼠進(jìn)行超聲霧化吸入(霧化量由小到大)15-20秒,然后自然吸入15-20秒,出現(xiàn)呼吸頻率加快、點(diǎn)頭呼吸、咳嗽、鼻煽、抽搐等癥狀時(shí)為引喘成功。此后,每天以1%卵蛋白生理鹽水霧化誘喘。按最大霧量,自然吸入15-30秒,使哮喘反復(fù)發(fā)作,連續(xù)3天;正常對(duì)照組以等量生理鹽水進(jìn)行腹腔注射和霧化。在第一次誘喘24小時(shí)后,即從第16天開始分別胃飼給藥,正常對(duì)照組及
3、模型組予生理鹽水,西藥組予地塞米松片(1mg/kg)胃飼;中藥小劑量組及中藥大劑量組分別予固本防喘膠囊(雄蜂蛹、仙靈脾、補(bǔ)骨脂、丹參、巴戟天、黃芪、太子參、兔絲子、附片組成)濃縮液(每毫升含生藥2克)小劑量(2.5g/kg)及大劑量(7.5g/kg)胃飼治療10天。觀察造模前后及藥物治療后豚鼠一般情況;療程結(jié)束后,處死動(dòng)物,收集各組動(dòng)物支氣管肺泡灌洗液及肺組織標(biāo)本,觀察肺泡灌洗液中血細(xì)胞計(jì)數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞含量變化;肺組織形態(tài)及
4、病理學(xué)改變;TUNEL法檢測(cè)肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞凋亡及免疫組織化學(xué)方法觀察各組豚鼠肺組織中Bc1-2及Bax蛋白表達(dá)的情況。結(jié)果采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS10.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析處理,計(jì)數(shù)資料以x±s表示,組間資料比較用方差分析。 [結(jié)果]空白對(duì)照組豚鼠體重自然增加,一般情況可,無死亡。致敏后的豚鼠普遍精神較差,活動(dòng)減少,進(jìn)食及飲水量明顯下降。1-2天后逐漸恢復(fù)正常。第16天哮喘模型組3只,西藥對(duì)照組1只,中藥小劑量組2只豚鼠出現(xiàn)明顯
5、皮毛蓬松現(xiàn)象。第二次誘喘時(shí),哮喘模型組1只豚鼠哮喘發(fā)作嚴(yán)重后死亡。用藥后各組豚鼠情況均較哮喘模型組明顯改善,但不能恢復(fù)到正常對(duì)照組的水平。中藥大劑量組豚鼠肺組織血管損傷修復(fù),肺泡間隔變窄,上皮增生改善,炎細(xì)胞明顯減少,肺泡腔明晰。與模型組相比,氣道炎性細(xì)胞浸潤(rùn)顯著減少,與西藥對(duì)照組相當(dāng);BALF中血細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少,與哮喘模型組比較有顯著性差異(P<0.01),與西藥對(duì)照組相當(dāng)(P>0.05);豚鼠氣道嗜酸性
6、細(xì)胞凋亡明顯增加,與哮喘模型組比較亦有顯著性差異(P<0.01),與西藥對(duì)照組相當(dāng)(P>0.05);哮喘豚鼠氣道Bax表達(dá)增加,Bc1-2表達(dá)降低,干擾肺組織Bcl-2/Bax的平衡,與哮喘模型組比較有顯著差異(P<0.05)。 [結(jié)論]固本防喘膠囊能誘導(dǎo)或促進(jìn)哮喘豚鼠氣道EOS凋亡,從而減輕氣道炎性細(xì)胞浸潤(rùn),控制氣道慢性炎癥,達(dá)到防治哮喘的作用。其可能作用機(jī)制是通過改變Bc1-2和Bax蛋白在哮喘豚鼠肺組織的表達(dá),即干擾肺組織
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