局部溫?zé)岑煼ㄖ委熸咦咏z菌病模型小鼠療效觀察及溫?zé)釋?duì)皮損內(nèi)IFN-γ表達(dá)的影響.pdf

1、局部溫?zé)岑煼ㄊ擎咦咏z菌病的治療方法之一。目前認(rèn)為，該方法的機(jī)制是其直接作用于病原菌，同時(shí)影響機(jī)體的免疫功能。本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察溫?zé)岑煼ǖ寞熜Р⑼ㄟ^免疫組化的方法研究溫?zé)嶂委熀笃p內(nèi)細(xì)胞因子的變化。從機(jī)體局部細(xì)胞免疫功能變化的角度探討熱療的作用機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)材料和方法： 一、溫?zé)岑煼ㄖ委熸咦咏z菌病模型小鼠療效觀察 (一)材料 申克孢子絲菌菌株(12628)來自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科，為皮膚淋巴管型

2、孢子絲菌病患者的分離株。 BALB/C雌性小鼠，周齡8-10w，體重20-22g，30只，均于尾部近端皮下分2點(diǎn)注射菌懸液各約0.05ml(濃度約1×108個(gè)/ml)，建立孢子絲菌病小鼠模型。約兩周待出現(xiàn)皮損后隨機(jī)分為對(duì)照組和治療組，每組15只。 (二)方法 治療組接種2w后用恒溫水浴箱對(duì)小鼠尾部皮損局部水浴熱療，溫度43℃，3次/w，15min/次，共12次。對(duì)照組接種后不予任何處置。熱療開始即觀察治療反應(yīng)，

3、如皮損大小變化，炎癥反應(yīng)強(qiáng)度等。溫?zé)嶂委熀笥^察皮損消退記為有效，計(jì)算兩組有效的百分比。 (三)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所得的數(shù)據(jù)用SPSS13軟件進(jìn)行分析處理，組間的比較用校正的卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)效能為0.05。 二、局部溫?zé)嶂委煂?duì)皮損內(nèi)IFN-γ表達(dá)的影響 (一)材料 動(dòng)物模型及溫?zé)岑煼ㄍ?(二)方法及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 20只小鼠分治療組和對(duì)照組，每組10只。加熱2次后各組小鼠接種處活檢，做HE、PA

4、S染色和免疫組化皮損內(nèi)IFN-γ染色。 光學(xué)顯微鏡下觀察IFN-γ表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞，胞漿紅染為陽(yáng)性，于200倍光鏡下每張切片選3個(gè)真皮內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯的視野，計(jì)數(shù)視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞占同類細(xì)胞的百分比，表達(dá)<10％記為陰性(-)。陽(yáng)性細(xì)胞的標(biāo)本包括四個(gè)等級(jí)：10％-25％浸潤(rùn)細(xì)胞染色記為(+)，25％-50％浸潤(rùn)細(xì)胞染色記為(++)，50％-75％浸潤(rùn)細(xì)胞染色記為(+++)，>75％浸潤(rùn)細(xì)胞染色記為(++++)。 (三)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

5、 采用SPSS13統(tǒng)計(jì)分析軟件處理數(shù)據(jù)。使用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，檢驗(yàn)效能為0.05。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 一、溫?zé)釋?duì)孢子絲菌病模型小鼠療效的觀察 接種后一周左右出現(xiàn)皮損。第二周、第三周皮損最顯著。主要表現(xiàn)為接種處紅腫、結(jié)節(jié)、潰瘍、溢膿及結(jié)痂。伴隨熱療次數(shù)增加治療組皮損紅腫消退、潰瘍愈合及結(jié)痂均較對(duì)照組快。接種后一月所有小鼠皮損開始逐漸消退，但是加熱組消退更加明顯。加熱六次即接種后一月治療組消退的占6

6、0％，而對(duì)照組占13.3％。加熱十二次即接種后四十天加熱組占80％，對(duì)照組占20％。以上P值均小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 二、溫?zé)釋?duì)孢子絲菌病模型小鼠皮損內(nèi)IFN-γ表達(dá)的影響 IFN-γ在表皮呈彌漫性表達(dá)，基底膜向上有減弱的趨勢(shì)。真皮毛囊及皮脂腺結(jié)構(gòu)也有表達(dá)，呈彌漫性淡染。以上正常皮膚染色結(jié)果與熱療組及對(duì)照組基本相同。真皮陽(yáng)性主要表達(dá)在單核淋巴樣細(xì)胞的胞漿內(nèi)。而正常皮膚真皮幾無表達(dá)。熱療后真皮IFN-γ表達(dá)較對(duì)照組