局部溫熱對小鼠表皮朗格漢斯細胞數(shù)量和形態(tài)的影響.pdf

1、朗格漢斯細胞(Langerhans Cell，LC)是表皮中的抗原提呈細胞，在皮膚免疫功能中發(fā)揮重要作用。作為表皮中最重要的抗原提呈細胞，LC能識別、攝取、加工處理抗原，并轉(zhuǎn)移至局部淋巴結(jié)，將抗原提呈給T淋巴細胞。LC離開表皮進入淋巴結(jié)的過程是其誘導特異性皮膚免疫反應(yīng)關(guān)鍵的一步。 本實驗利用自主研制的溫熱治療設(shè)備加熱小鼠皮膚，觀察溫熱處理后小鼠表皮內(nèi)抗原提呈細胞-LC的數(shù)量及形態(tài)的動態(tài)變化情況，初步闡明溫熱對小鼠表皮內(nèi)LC的影響

2、，為溫熱治療皮膚疾病提供部分免疫學理論依據(jù)。 實驗材料和方法一、 第一部分:溫熱對小鼠表皮LC數(shù)量和形態(tài)的影響 1、材料:8周齡雌性SPF級Balb/C小鼠24只，隨機分為37℃組(對照組)、39℃組和41℃組。每只小鼠背部選擇4個面積為1.0×1.0cm的皮膚作為加熱部位(脊柱兩側(cè)每側(cè)各2個部位)，剃毛、麻醉后，采用遠紅外局部溫熱治療儀(我科和合作單位聯(lián)合研制，精度為±0.1℃)局部加熱小鼠皮膚，每個部位持續(xù)加

3、熱20分鐘，每只小鼠的4個部位均采用一種加熱溫度。四個部位分別于加熱后的24、48、72、96小時時間點，依次剪取被加熱的皮膚。 2、方法 將剪取的皮膚組織放入EDTA分離液(PH=7.2)中，37℃水浴箱水浴2小時，取出皮片，在解剖顯微鏡下分離真表皮。采用免疫組織化學的方法染色表皮內(nèi)LC。光學顯微鏡下觀察LC，細胞膜和(或)細胞質(zhì)呈棕褐色樹突狀細胞為LC，于400倍光鏡下每張片隨機選取5個非連續(xù)視野，計數(shù)方格內(nèi)的陽性細

4、胞數(shù)，計算出單位面積內(nèi)細胞的密度，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差的形式表示(x±s)。 3、統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0 for Windows軟件進行統(tǒng)計學分析處理。組內(nèi)和組間兩兩比較采用t檢驗，檢驗效能為0.05。 二、第二部分:局部溫熱引起的小鼠表皮LC動態(tài)變化的觀察 1、材料:8周齡雌性SPF級Balb/C小鼠29只，隨機分為未處理組(5只)，37℃組(8只)，39℃組(8只)和41℃組(8只)。在每只

5、小鼠背部選擇4個面積為1.0×1.0cm的皮膚作為加熱部位(脊柱兩側(cè)每側(cè)各2個部位)，剃毛、麻醉后，采用遠紅外局部溫熱治療儀局部加熱小鼠皮膚，每個部位持續(xù)加熱20分鐘，每只小鼠的4個部位均采用一種加熱溫度。分別于加熱后第1、3、5、7天時間點剪取被加熱的皮膚。 2、方法:及數(shù)據(jù)統(tǒng)計同第一部分 實驗結(jié)果： 一、第一部分溫熱對小鼠表皮LC數(shù)量和形態(tài)的影響 37℃組，I-A染色陽性細胞分布較均勻，有較多的樹突。

6、39℃組和41℃組，第24、48、72、96小時取材，光鏡所見：表皮內(nèi)朗格漢斯細胞變圓、變小，樹突數(shù)量減少甚至消失、長度變短，第72小時光鏡下僅見少量朗格漢斯細胞以及較多的點狀或者條索樣樹突。 39℃組、41℃組各時間點的LC密度分別與37℃組對應(yīng)時間點比較，LC密度明顯下降，有顯著性差異(P<0.01)。 39℃組與41℃組，兩組LC密度在各對應(yīng)時間點相比，在24、48小時，二者具有顯著性差異(P<0.05)；在72、

7、96小時，二者沒有顯著性差異(P>0.05)。 39℃組、41℃組小鼠表皮內(nèi)LC密度均在加熱后開始下降，72小時左右LC密度達到最低，然后呈逐漸上升的趨勢。其中，最初的48小時左右，41℃組LC密度的下降速度及幅度都要大于39℃組，但隨后，41℃組的LC密度減少速度逐漸變緩，而39℃組的LC密度減少速度加??；72小時左右，兩組小鼠表皮LC密度都達到最低水平，兩個最低值之間差異沒有顯著性(P>0.05)。 二、第二部分:局

8、部溫熱引起的小鼠表皮LC動態(tài)變化的觀察37℃組與未處理組相比，兩組組內(nèi)以及兩組之間LC密度沒有顯著差異(P>0.05)。 39℃組、41℃組分別與未處理組、37℃組相比，第1、3、5天時間點的LC密度差異均有顯著性(P<0.05)；在第7天時間點，LC密度差異無顯著性(P>0.05)。 39℃組和41℃組，第1天，兩組LC密度差異具有顯著性(P<0.01)；第3天，兩組LC密度差異沒有顯著性(P>0.05)，這個結(jié)果與實

9、驗第一部分結(jié)果吻合。第5天以及第7天，兩組LC密度之間均沒有顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 通過我們的研究觀察，得出以下結(jié)論： 溫熱能夠通過影響表皮內(nèi)LC而影響皮膚的免疫功能狀態(tài)，溫熱引起小鼠表皮內(nèi)LC數(shù)量和形態(tài)的變化，提示溫熱可能促進LC遷移和成熟，提示溫熱在免疫反應(yīng)誘導時期起增強作用。 溫熱引起的LC數(shù)量減少是可逆轉(zhuǎn)的，小鼠表皮受到溫熱刺激作用之后，表皮內(nèi)LC數(shù)量逐漸下降，72小時左右降到最低，