溫?zé)岑煼ㄅc口服碘化鉀溶液對孢子絲菌病模型小鼠表皮朗格漢斯細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:
　　 孢子絲菌病是由于感染申克氏孢子絲菌而引起的一種皮膚、皮下組織及其附近淋巴管慢性、化膿性炎癥的深部真菌病。目前，碘化鉀溶液仍為治療本病的首選藥物，但因部分患者對碘化鉀過敏或合并有肺結(jié)核，影響了部分人群在臨床上的應(yīng)用。溫?zé)岑煼ㄊ且环N有效的替代輔助療法，可以通過增強(qiáng)局部皮膚免疫促進(jìn)皮損消退，適用于一些不能應(yīng)用口服藥的孢子絲菌病患者，如孕婦、肝腎功能受損者及藥物過敏者，其臨床實施方便，無創(chuàng)傷，痛苦小，患者易于接受。

2、　　 局部溫?zé)嶂委煹淖饔脵C(jī)制目前尚不明確。但腫瘤熱療方面及目前對感染性皮膚病的治療研究結(jié)果均發(fā)現(xiàn)，溫?zé)峥梢栽鰪?qiáng)機(jī)體的免疫功能。表皮朗格漢斯細(xì)胞(Langerhans Cell，LC)是樹突狀細(xì)胞家族的一員，常駐于表皮，為皮膚內(nèi)主要的抗原提呈細(xì)胞。表皮朗格漢斯細(xì)胞在誘導(dǎo)皮膚免疫反應(yīng)中發(fā)揮非常重要的作用，它們能夠捕獲加工皮膚中遇到的抗原，并在轉(zhuǎn)移至局部引流淋巴結(jié)的過程中將其表達(dá)在MHC-Ⅰ和Ⅱ類分子中，在那里將抗原提呈給效應(yīng)T細(xì)胞，從而啟

3、動適應(yīng)性免疫應(yīng)答，朗格漢斯細(xì)胞的遷移在皮膚免疫反應(yīng)中起著關(guān)鍵性作用。
　　 本實驗利用溫?zé)嶂委熢O(shè)備及碘化鉀溶液對感染孢子絲菌病的小鼠進(jìn)行治療，觀察小鼠兩種治療后表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞數(shù)量的影響，從局部免疫功能變化角度探討熱療的作用機(jī)制。
　　 實驗材料和方法:
　　 一、孢子絲菌病模型小鼠皮損周圍表皮LC與正常皮膚處表皮LC的比較:
　　 1、材料
　　 申克孢子絲菌菌株(CMU14034)來自中國醫(yī)

4、科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科，為局限型皮膚型孢子絲菌病患者的分離株。
　　 昆明雌性小鼠，周齡8-10周，體重20-22克，10只，于背部皮下注射菌懸液約0.1ml（濃度約1×108個/ml），建立孢子絲菌病小鼠模型，約兩周出現(xiàn)皮損。
　　 2、方法
　　 將小鼠麻醉、背部脫毛，剪取面積為1.0×1.0cm的皮膚（感染小鼠取皮損周圍未破壞皮膚及遠(yuǎn)端正常皮膚）。將剪取的皮膚放入EDTA分離液(PH=7.2)中，37℃恒

5、溫箱恒溫2小時，取出皮片，在解剖顯微鏡下分離真表皮。采用免疫組織化學(xué)的方法染色表皮內(nèi)LC。光學(xué)顯微鏡下觀察LC，細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞質(zhì)呈棕褐色樹突狀細(xì)胞為LC，于20倍光鏡下每張片隨機(jī)選取6個非連續(xù)視野，計數(shù)方格內(nèi)的陽性細(xì)胞數(shù)，計算出單位面積內(nèi)細(xì)胞的密度，數(shù)據(jù)以中位數(shù)的形式表示。
　　 3、統(tǒng)計學(xué)處理
　　 采用SPSS17.0和Graphpad5.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析和圖形制作，所有數(shù)據(jù)以中位數(shù)表示，兩組間實驗指標(biāo)的比較

6、采用Mann-Whitney U檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)檢驗，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 二、溫?zé)岑煼?、碘化鉀溶液治療孢子絲菌病模型小鼠LC的比較
　　 1、材料
　　 申克孢子絲菌菌株(CMU14034)來自中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科，為局限型皮膚型孢子絲菌病患者的分離株。
　　 昆明雌性小鼠，周齡8-10周，體重20-22克，30只，于背部皮下注射菌懸液約0.1ml（濃度

7、約1×108個/ml），建立孢子絲菌病小鼠模型，約兩周待出現(xiàn)皮損后隨機(jī)分為對照組、碘化鉀組和熱療組，每組10只。
　　 2、方法
　　 熱療組接種兩周后采用遠(yuǎn)紅外局部溫?zé)嶂委焹x局部加熱小鼠皮損，溫度41-43℃，20分鐘/次，隔日一次，皮損恢復(fù)正常后停止。碘化鉀組給予10％碘化鉀溶液，給藥方式:碘化鉀溶液根據(jù)小鼠平均每日飲水量（4-6ml/只）配制成0.24％水溶液代替飲用水（相當(dāng)于人體用量的30ml/天）。對照組接種后

8、不予任何處置。治療開始即觀察治療反應(yīng)，如，皮損大小變化;炎癥反應(yīng)強(qiáng)度。治療后皮損消退即進(jìn)行表皮朗格漢斯細(xì)胞計數(shù)（計數(shù)方法同上）并做皮損真菌培養(yǎng)，真菌培養(yǎng)陰性作為治療有效;同時比較兩種治療方法皮損消退所需治療時間。
　　 3、統(tǒng)計學(xué)處理
　　 所得數(shù)據(jù)用應(yīng)用SPSS17.0和Graphpad5.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析和圖形制作，所有數(shù)據(jù)以中位數(shù)表示，兩組間實驗指標(biāo)的比較采用Mann-Whitney U檢驗相關(guān)性分析采用Spe

9、arman秩相關(guān)檢驗，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 一、孢子絲菌病模型小鼠皮損周圍表皮LC與正常皮膚處表皮LC的比較:
　　 孢子絲菌病模型小鼠正常表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞分布較均勻，有較多的樹突，孢子絲菌病皮損周圍表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞變圓、變小，樹突數(shù)量減少甚至消失、長度變短。孢子絲菌病皮損周圍表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞數(shù)目較正常表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞分布密度明顯下降，有顯著性差異(P=0.0005)。

10、　　 二、溫?zé)岑煼ㄅc碘化鉀溶液治療孢子絲菌病模型小鼠療效表皮LC的比較:
　　 1、溫?zé)岑煼ㄅc碘化鉀溶液治療孢子絲菌病模型小鼠治療時間的比較:
　　 接種后一周左右出現(xiàn)皮損。第二周、第三周皮損最為顯著，主要變現(xiàn)為接種處紅腫、結(jié)節(jié)、潰瘍、溢膿及結(jié)痂。伴隨著治療次數(shù)增加，熱療組及碘化鉀組小鼠皮損處紅腫消退、潰瘍愈合及痂皮脫落均較對照組快，且溫?zé)峤M小鼠皮損干燥結(jié)痂較碘化鉀小鼠時間短。治療結(jié)束后熱療組小鼠接種處活檢真菌培養(yǎng)9只

11、為陰性，1只為陽性;碘化鉀組小鼠治療結(jié)束后皮損活檢真菌培養(yǎng)結(jié)果7只為陰性，3只為陽性;對照組接種后四十天真菌培養(yǎng)9只均為陽性，1只為陰性。
　　 2、溫?zé)岑煼ㄅc碘化鉀溶液治療孢子絲菌病模型小鼠表皮LC數(shù)量的比較:
　　 溫?zé)峤M小鼠皮損周圍表皮內(nèi)LC密度較感染組明顯下降(P＜0.001)，碘化鉀組小鼠皮損周圍表皮內(nèi)LC密度較感染組無顯著差異(P=0.3256)，溫?zé)峤M小鼠皮損周圍表皮內(nèi)LC密度下降較碘化鉀組小鼠更為明顯，差

12、異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0002)。
　　 結(jié)論:
　　 通過我們的研究觀察，得出以下結(jié)論:
　　 孢子絲菌病小鼠模型有自愈傾向。
　　 孢子絲菌感染可以影響表皮內(nèi)LC從而調(diào)動皮膚的免疫功能，感染孢子絲菌病的小鼠表皮內(nèi)LC密度較正常表皮內(nèi)LC密度明顯下降。
　　 溫?zé)岑煼ㄖ委熸咦咏z菌病模型小鼠有效，小鼠表皮受到溫?zé)岽碳ぷ饔煤?，表皮?nèi)LC數(shù)量下降，LC形態(tài)發(fā)生改變;口服碘化鉀溶液治療后孢子絲菌病模型