孢子絲菌病快速診斷方法的探究.pdf

1、作為孢子絲菌病的病原菌，申克氏孢子絲菌主要致皮膚、皮下組織及附近淋巴組織的亞急性和（或）慢性感染，偶爾也可向內(nèi)臟和骨骼播散，嚴(yán)重者甚至可引起全身的播散性感染。本病在我國(guó)東北地區(qū)相對(duì)多發(fā)，且部分區(qū)域可成批發(fā)生，對(duì)人們的健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。盡管如此，該病的診斷較目前仍較為困難;真菌鏡檢及培養(yǎng)陽(yáng)性率均較低，且培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng)（真菌生長(zhǎng)緩慢）;組織病理也缺乏特異性，僅表現(xiàn)為肉芽腫性炎癥，極易與其它感染性疾病想混。在該病的診斷方面，近些年來(lái)不少學(xué)者進(jìn)行了

2、多方面的探索（如血清學(xué)檢測(cè)、電鏡技術(shù)免、疫熒光抗體及免疫病理）。因存在特異性問(wèn)題，血清學(xué)檢測(cè)未能延續(xù);免疫熒光抗體與免疫病理技術(shù)也因存在抗體不易標(biāo)準(zhǔn)化、病理易出現(xiàn)非特異染色等問(wèn)題而使其應(yīng)用受限;電鏡技術(shù)由于存在視野小、操作復(fù)雜，尋找病原菌較為困難等問(wèn)題而難以推廣。本研究擬采用改進(jìn)的CTAB法提取申克孢子絲菌基因組DNA，并根據(jù)申克孢子絲菌鈣調(diào)蛋白基因保守序列設(shè)計(jì)合成一對(duì)寡核苷酸引物，通過(guò)PCR技術(shù)，以探討快速檢測(cè)及鑒定申克孢子絲菌的方法

3、，進(jìn)而建立一種能敏感、特異且快速地檢測(cè)孢子絲菌病的分子生物學(xué)鑒定方法，以期為臨床孢子絲菌病的診療工作提供可靠依據(jù)。
　　目的:1.探究申克孢子絲菌的DNA提取方法;
　　2.探索申克孢子絲茵的種特異性引物，運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)方法鑒定申克孢子絲菌;從而為臨床孢子絲菌病的診療工作提供分子生物學(xué)依據(jù)。
　　方法:1.用ViscozymeL酶替代液氮研磨破壁提取孢子絲菌的基因組DNA;
　　2.根據(jù)申克孢子絲茵鈣調(diào)蛋白基因

4、序列設(shè)計(jì)一對(duì)寡核苷酸引物，分別對(duì)52株申克孢子絲菌及3種6株普通真菌（曲霉、黑霉、白色念珠菌）的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
　　結(jié)果:1.用ViscozymeL酶替代液氮研磨破壁成功提取出孢子絲菌的基因組DNA。
　　2.特異性引物對(duì)52株申克孢子絲菌均可擴(kuò)增出一條約430bp的片段，而對(duì)白色念珠茵、曲霉、黑霉基因組DNA擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。
　　結(jié)論:1.用ViscozymeL酶替代液氮研磨破壁提取孢子絲菌基因組DN