孢子絲菌病快速診斷方法的探究.pdf

1、作為孢子絲菌病的病原菌，申克氏孢子絲菌主要致皮膚、皮下組織及附近淋巴組織的亞急性和（或）慢性感染，偶爾也可向內臟和骨骼播散，嚴重者甚至可引起全身的播散性感染。本病在我國東北地區(qū)相對多發(fā)，且部分區(qū)域可成批發(fā)生，對人們的健康構成嚴重威脅。盡管如此，該病的診斷較目前仍較為困難;真菌鏡檢及培養(yǎng)陽性率均較低，且培養(yǎng)耗時長（真菌生長緩慢）;組織病理也缺乏特異性，僅表現為肉芽腫性炎癥，極易與其它感染性疾病想混。在該病的診斷方面，近些年來不少學者進行了

2、多方面的探索（如血清學檢測、電鏡技術免、疫熒光抗體及免疫病理）。因存在特異性問題，血清學檢測未能延續(xù);免疫熒光抗體與免疫病理技術也因存在抗體不易標準化、病理易出現非特異染色等問題而使其應用受限;電鏡技術由于存在視野小、操作復雜，尋找病原菌較為困難等問題而難以推廣。本研究擬采用改進的CTAB法提取申克孢子絲菌基因組DNA，并根據申克孢子絲菌鈣調蛋白基因保守序列設計合成一對寡核苷酸引物，通過PCR技術，以探討快速檢測及鑒定申克孢子絲菌的方法

3、，進而建立一種能敏感、特異且快速地檢測孢子絲菌病的分子生物學鑒定方法，以期為臨床孢子絲菌病的診療工作提供可靠依據。
　　目的:1.探究申克孢子絲菌的DNA提取方法;
　　2.探索申克孢子絲茵的種特異性引物，運用聚合酶鏈反應方法鑒定申克孢子絲菌;從而為臨床孢子絲菌病的診療工作提供分子生物學依據。
　　方法:1.用ViscozymeL酶替代液氮研磨破壁提取孢子絲菌的基因組DNA;
　　2.根據申克孢子絲茵鈣調蛋白基因

4、序列設計一對寡核苷酸引物，分別對52株申克孢子絲菌及3種6株普通真菌（曲霉、黑霉、白色念珠菌）的基因組DNA進行PCR擴增。
　　結果:1.用ViscozymeL酶替代液氮研磨破壁成功提取出孢子絲菌的基因組DNA。
　　2.特異性引物對52株申克孢子絲菌均可擴增出一條約430bp的片段，而對白色念珠茵、曲霉、黑霉基因組DNA擴增結果均為陰性。
　　結論:1.用ViscozymeL酶替代液氮研磨破壁提取孢子絲菌基因組DN