溫?zé)岑煼ㄅc口服碘化鉀溶液治療孢子絲菌病模型小鼠療效比較.pdf

1、前言
　　 孢子絲菌病是常見的深部真菌病,世界各地均有流行。碘化鉀是治療本病的首選藥物,但有其局限性,影響了在臨床上的應(yīng)用。溫?zé)岑煼ㄒ话阕鳛樘娲o助療法,是簡(jiǎn)便易行且有效的局部治療方法,即可促進(jìn)皮損消退,更適用于一些不能應(yīng)用口服藥的孢子絲菌病患者,如孕婦,肝腎功能受損者,而且其治療簡(jiǎn)單、費(fèi)用小、無創(chuàng)傷、痛苦小、患者耐受性較好,易于接受。
　　 目前認(rèn)為,溫?zé)岑煼ǖ臋C(jī)制是直接作用于病原菌,同時(shí)影響機(jī)體的免疫功能。本研究通過

2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察溫?zé)岑煼ǖ寞熜Р⑴c口服碘化鉀溶液療法相比較,并通過免疫組化的方法研究溫?zé)岑煼ㄖ委熀笃p內(nèi)熱休克蛋白70的變化,從機(jī)體局部細(xì)胞免疫功能變化的角度探討溫?zé)岑煼ǖ淖饔脵C(jī)制。
　　 材料和方法
　　 一、溫?zé)岑煼ㄅc口服碘化鉀溶液治療孢子絲菌病模型小鼠療效比較
　　 (一)材料
　　 申克孢子絲菌菌株(CMU12933)來自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科,為局限型皮膚型孢子絲菌病患者的分離株。
　

3、　 昆明雌性小鼠,45只,周齡8-10周,體重18-22克,均于尾部近端皮下近1/3及2/3處兩點(diǎn)注射孢子絲菌菌懸液約0.05毫升(濃度約1×108個(gè)/毫升),建立孢子絲菌病小鼠模型。待出現(xiàn)皮損(約兩周)后隨機(jī)分為對(duì)照組、口服碘化鉀組和溫?zé)嶂委熃M,每組15只。
　　 (二)方法
　　 溫?zé)嶂委熃M接種兩周后用恒溫水浴箱對(duì)小鼠尾部皮損局部水浴治療,溫度42-43℃,20分鐘/次,隔日1次,共12次?？诜饣浗M予10％碘化

4、鉀溶液口服,給藥方式:碘化鉀溶液根據(jù)小鼠平均每日飲水量(4-6ml/只)配制成0.24％水溶液代替飲用水(相當(dāng)于人體用量的30ml/天)。對(duì)照組接種后不予任何處置。溫?zé)嶂委熼_始觀察皮損大小變化、炎癥反應(yīng)強(qiáng)度等治療反應(yīng)。接種40天后皮損消退記為有效,計(jì)算三組有效率,同時(shí)小鼠接種處皮損活檢真菌培養(yǎng),真菌培養(yǎng)陰性也記為治療有效。
　　 (三)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 使用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析處理,組間比較采用校正的卡方檢驗(yàn),檢

5、驗(yàn)效能為0.05.
　　 二、皮損內(nèi)HSP70表達(dá)
　　 (一)材料
　　 動(dòng)物模型及溫?zé)岑煼ㄍ稀?br>　　 (二)方法及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
　　 60只昆明雌性小鼠,實(shí)驗(yàn)方法同上。
　　 溫?zé)嶂委熼_始即觀察各組治療反應(yīng)如皮損大小變化、炎癥反應(yīng)強(qiáng)度等。第1,3,7,15次熱療8小時(shí)后各組取5只小鼠接種處活檢做真菌培養(yǎng),HE及免疫組化HSP70染色。
　　 HSP70結(jié)果判定方法:于10×40倍

6、光鏡下觀察組織切片的顯色反應(yīng),每張切片選3個(gè)真皮內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯的視野,參照半定量分級(jí)評(píng)分方法,需兩名觀察者對(duì)切片評(píng)分:(1)不著色為0,著色為淺棕黃色為1,深棕色2；(2)陽性著色細(xì)胞比例<1％為0,<20％為1,20％-50％為2,>50％為3,以上兩項(xiàng)相加為0-1判為-,為2判為+,為3判為++,≥4判為+++。
　　 (三)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理數(shù)據(jù)。使用Kruskal-Walli

7、s H檢驗(yàn),檢驗(yàn)效能為0.05。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 一、溫?zé)岑煼ㄅc口服碘化鉀溶液治療孢子絲菌病模型小鼠療效比較
　　 接種后40天(加熱十二次)溫?zé)嶂委熃M小鼠尾部皮損活檢真菌培養(yǎng)均陰性,口服碘化鉀組小鼠治療結(jié)束皮損活檢真菌培養(yǎng)結(jié)果為13只陰性,2只陽性,對(duì)照組接種四十天真菌培養(yǎng)結(jié)果為14只陽性,1只陰性；溫?zé)嶂委熃M皮損消退的小鼠占86％,口服碘化鉀組占93.3％,對(duì)照組占13.3％,以上溫?zé)嶂委熃M與口服碘化鉀

8、組兩組真菌培養(yǎng)結(jié)果及療效進(jìn)行比較,P值均大于0.05,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,溫?zé)嶂委熃M,口服碘化鉀組分別與對(duì)照組比較,P值均小于0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 二、皮損內(nèi)HSP70表達(dá)
　　 HSP70在表皮呈彌漫性表達(dá),基底膜向上有減弱的趨勢(shì)。真皮毛囊及皮脂腺也有表達(dá),呈彌漫性淡染。以上溫?zé)嶂委熃M、對(duì)照組及口服碘化鉀組與正常皮膚染色結(jié)果基本相同。真皮陽性主要表達(dá)在炎性細(xì)胞的胞漿內(nèi),而正常皮膚真皮幾乎無表達(dá)。熱療后真皮HSP70