乳腺癌基因組表達(dá)譜中miRNA的血清學(xué)差異性表達(dá)分析.pdf

1、背景與目的：
　　 miRNA具有較好的組織特異性，在不同腫瘤中具有特定的表達(dá)模式，在乳腺癌、肝癌、肺癌、腸癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤中得到了證實(shí)。腫瘤組織中的miRNA表達(dá)譜與腫瘤發(fā)生及預(yù)后相關(guān)，但是檢測(cè)技術(shù)復(fù)雜、創(chuàng)傷大，且必須在手術(shù)之后才能獲得標(biāo)本，難以真正應(yīng)用于臨床。相比較而言，外周血血清較易獲得和檢測(cè)，臨床應(yīng)用便捷，利于推廣，血清miRNA一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，便引起了研究者的極大興趣。血清miRNA作為腫瘤標(biāo)志物的研究仍存在許多問題

2、，如血清miRNA所發(fā)揮的生物學(xué)功能尚未明確，血清和組織miRNA水平的相關(guān)性仍存在爭(zhēng)議等。本研究旨在探討乳腺癌患者血清miRNA的表達(dá)水平與乳腺癌組織內(nèi)miRNA的表達(dá)情況是否一致，并進(jìn)一步闡明血清miRNA作為乳腺癌診斷、治療的生物學(xué)標(biāo)志物的可行性和臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究對(duì)上述問題的闡明，將有助于加快血清miRNA作為腫瘤生物標(biāo)志物向臨床轉(zhuǎn)化的應(yīng)用進(jìn)程，為腫瘤早期診斷、判斷生物學(xué)行為及預(yù)后評(píng)估提供新思路。
　　 方法：

3、　　 利用miRNA芯片對(duì)8對(duì)乳腺癌組織及配對(duì)的癌旁組織中miRNA表達(dá)譜進(jìn)行分析，并利用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，篩選出差異性表達(dá)的目的miRNA。另選取天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2011年3-10月經(jīng)病理診斷明確的乳腺癌患者165例，同時(shí)選取我院體檢的健康女性120例為對(duì)照組，采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time RT-PCR)測(cè)定血清中目的miRNA相對(duì)表達(dá)量。
　　 結(jié)果：
　　 1.利

4、用miRNA芯片對(duì)8對(duì)乳腺癌組織及配對(duì)的癌旁組織中924種miRNA表達(dá)情況進(jìn)行分析，共篩選出23種差異性表達(dá)的miRNA，其中hsa-miR-155和hsa-miR-193b表達(dá)上調(diào)，hsa-miR-145、hsa-miR-381、hsa-miR-132、hsa-miR-206、hsa-miR-199b-5p、hsa-miR-100、hsa-miR-335、hsa-miR-497、hsa-miR-99a、hsa-miR-10b、hsa

5、-miR-125b、hsa-let-7b、hsa-miR-10a、hsa-miR-126、hsa-miR-30a、hsa-miR-143、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-19b、hsa-miR-26a、rno-miR-324-3p表達(dá)下調(diào)，hsa-miR-10b在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中表達(dá)上調(diào)，而在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中表達(dá)下調(diào)。
　　 2.用miRNA real time RT-PCR對(duì)芯片篩查的結(jié)果進(jìn)

6、行驗(yàn)證，共篩選出10種差異性表達(dá)的miRNA，其中，hsa-miR-155和hsa-miR-193b表達(dá)上調(diào)，hsa-miR-100、hsa-miR-206、hsa-miR-381、hsa-miR-132、hsa-miR-199b-5p、hsa-miR-497和hsa-miR-99a表達(dá)下調(diào)，miRNA-10b在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中表達(dá)上調(diào)，而在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中表達(dá)下調(diào)。以差異表達(dá)量大于2倍，RT-PCR中CT值小于30

7、作為標(biāo)準(zhǔn)，共篩選出4種miRNA，即miR-10b、miR-100、miR-155以及miR-206進(jìn)行下一步的血清學(xué)表達(dá)分析。
　　 3.本研究共對(duì)165例乳腺癌患者和120例健康對(duì)照組血清中目標(biāo)miRNA表達(dá)情況進(jìn)行了定量分析，結(jié)果表明miRNA在血清中穩(wěn)定表達(dá)。
　　 4.對(duì)照組與乳腺癌組miR-100、miR-155及miR-206相對(duì)表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);兩組miR-10b相對(duì)表達(dá)量比

8、較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。乳腺癌患者血清中4種目標(biāo)miRNA的表達(dá)情況與前期乳腺癌組織中的表達(dá)情況一致。
　　 5.miR-10b、miR-155和miR-206的表達(dá)與乳腺癌某些臨床病理特征相關(guān)，其中miR-10b與淋巴結(jié)狀態(tài)相關(guān)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組miR-10b的表達(dá)水平低于正常對(duì)照組(P=0.001)，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組miR-10b的表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P=0.001，0.001)。miR-206

9、的表達(dá)水平在不同分子分型間存在差異(P=0.040)，miR-206的表達(dá)與雌激素受體狀態(tài)相關(guān)，在ER陽性組中miR-206的下調(diào)更加顯著(P=0.035)。miR-155的表達(dá)與臨床分期(P=0.001)、Ki-67(P=0.001)、突變型P53(P=0.027)相關(guān)，臨床分期晚、Ki-67高表達(dá)、突變型P53陽性組miR-155上調(diào)更加顯著。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過miRNA組織芯片初步篩選以及real ti

10、me RT-PCR驗(yàn)證，本研究共發(fā)現(xiàn)10種miRNA在乳腺癌組織及相應(yīng)的癌旁組織中存在顯著性差異，初步建立了乳腺癌特異性的miRNA差異表達(dá)譜，為miRNA在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中作用機(jī)制的深入闡明奠定了基礎(chǔ)，為乳腺癌診斷提供了新的潛在的生物學(xué)標(biāo)志物。
　　 2.研究顯示，血清miRNA的表達(dá)模式與乳腺癌組織存在良好的一致性，因此血清可以作為乳腺癌相關(guān)miRNA研究的標(biāo)本來源，相對(duì)于組織來講更具有臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 3.血清