肝癌患者組織及血清中mRNA和miRNA差異性表達分析.pdf

1、本文主要從以下幾部分進行論述：
　　第一部分
　　目的:篩選人肝癌組織及其癌旁正常肝組織差異性表達mRNA并進行生物信息學分析。
　　方法:運用Agilent8x60K基因芯片技術(shù)檢測人肝癌組織及其癌旁正常肝組織的基因表達譜，利用生物信息學方法對差異性表達基因進行GO和Pathway分析，并采用Real-time PCR技術(shù)驗證芯片結(jié)果。
　　結(jié)果:與癌旁正常肝組織相比，肝癌組織差異性表達基因共有2694個，其中

2、上調(diào)基因有924個，下調(diào)基因有1770個。GO和Pathway分析提示差異性表達基因可能參與轉(zhuǎn)錄、氧化還原、信號轉(zhuǎn)導、離子轉(zhuǎn)運、免疫應答、細胞黏附及結(jié)合功能等生物過程。Real-time PCR驗證結(jié)果顯示GPC3和CTHRC1在肝癌組織中表現(xiàn)為高表達，而GLS2在肝癌組織中表現(xiàn)為低表達，提示Real-time PCR驗證結(jié)果與芯片檢測結(jié)果具有較好一致性。
　　結(jié)論:基因芯片篩選出的差異性表達mRNA可能參與信號轉(zhuǎn)導、免疫應答等諸

3、多關(guān)鍵環(huán)節(jié)，可為肝癌相關(guān)特異性標記靶向治療提供新的思路。
　　第二部分
　　目的:篩選人肝癌組織及其癌旁正常肝組織差異性表達miRNA并進行靶基因預測分析。
　　方法:利用miRNA芯片技術(shù)檢測人肝癌組織及其癌旁正常肝組織的miRNA表達譜，篩選出差異性表達的miRNA，利用生物信息學軟件對差異性表達miRNA進行靶基因預測，并用Real-time PCR技術(shù)驗證芯片結(jié)果。
　　結(jié)果:與癌旁正常肝組織相比，肝癌組

4、織差異性表達miRNA共有33個，其中上調(diào)miRNA有21個，下調(diào)miRNA有12個。利用生物信息學軟件對差異性表達miRNA進行靶基因預測并與第一部分的mRNA芯片結(jié)果進行比對并取交集后得到了14個與肝癌密切相關(guān)且值得關(guān)注的miRNA及其靶基因組合。Real-time PCR驗證結(jié)果顯示miR-155與miR-96在肝癌組織中表現(xiàn)為高表達，而miR-99a在肝癌組織中表現(xiàn)為低表達，提示Real-time PCR驗證結(jié)果與芯片檢測結(jié)果具

5、有較好一致性。
　　結(jié)論:miRNA芯片篩選出的差異性表達miRNA及其靶基因可能參與肝癌侵襲轉(zhuǎn)移等諸多關(guān)鍵環(huán)節(jié)，針對特異性miRNA及其靶基因的治療可為肝癌患者靶向治療開辟新的道路。
　　第三部分
　　目的:檢測miR-155、miR-96和miR-99a在肝癌患者血清中表達水平并進行臨床資料分析。
　　方法:收集30例肝癌患者及健康對照血清標本，利用Real-time PCR技術(shù)檢測經(jīng)過驗證的差異性表達miR

6、NA(miR-155、miR-96、miR-99a)的表達水平并進行臨床資料分析。
　　結(jié)果:利用Real-time PCR技術(shù)對miR-155，miR-96和miR-99a在血清中進行表達水平測定后，我們發(fā)現(xiàn)miR-155與miR-96的表達水平在肝癌患者血清中顯著上調(diào)，而miR-99a肝癌患者血清中表達水平顯著下調(diào)，以上結(jié)果與組織中相應miRNA表達水平具有高度一致性。以上差異性表達miRNA與肝癌患者的年齡、性別、腫瘤數(shù)量、